Η ανάπτυξη αξιόπιστων και τυποποιημένων μεθόδων για τον έλεγχο της ευαισθησίας των σμηνών κουνουπιών στα εντομοκτόνα είναι ζωτικής σημασίας για την κατανόηση της αποτελεσματικότητας νέων δραστικών συστατικών ή σκευασμάτων. Οι μέθοδοι για τον έλεγχο της ευαισθησίας των σμηνών κουνουπιών σε εντομοκτόνα ή προϊόντα επαφής (όπως αυτές που προωθούνται σε προγράμματα δημόσιας υγείας) είναι καθιερωμένες και τυποποιημένες. Ωστόσο, οι μέθοδοι ελέγχου για πτητικά ή αεροζόλ εντομοκτόνα που χρησιμοποιούνται σε οικιακά προϊόντα είναι δύσκολο να εφαρμοστούν αποτελεσματικά. Με βάση τις συστάσεις του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας για τα οικιακά εντομοκτόνα, αναπτύξαμε μια τυποποιημένη και υψηλής απόδοσης μέθοδο για τον έλεγχο προϊόντων αεροζόλ χρησιμοποιώντας κουνούπια σε κλουβιά και μια αποτελεσματική μέθοδο απολύμανσης που διεξήχθη σε θάλαμο δοκιμών Peet-Grady (θάλαμος δοκιμών PG). Επικυρώσαμε την αποτελεσματικότητα αυτής της νέας μεθόδου χρησιμοποιώντας πληθυσμούς ανθεκτικών και ευαίσθητων στα εντομοκτόνα κουνουπιών Aedes και Anopheles. Ένα νέο χαρακτηριστικό αυτής της μεθόδου είναι η συμπερίληψη ενός θαλάμου που κατευθύνεται στα κλουβιά κουνουπιών, επιτρέποντας την ποσοτική αξιολόγηση σε πραγματικό χρόνο των ποσοστών θανάτωσης κουνουπιών μετά την έκθεση σε εντομοκτόνο. Η απολύμανση με στυλεό απομακρύνει αποτελεσματικά το υπολειμματικό έλαιο αεροζόλ που περιέχει πυρεθροειδή από την επιφάνεια του θαλάμου δοκιμών, με ποσοστά θνησιμότητας μικρότερα από 2% για τα ευαίσθητα κουνούπια που δοκιμάστηκαν απευθείας στην επιφάνεια του θαλάμου. Δεν παρατηρήθηκε χωρική ετερογένεια στα ποσοστά θανάτωσης ή θνησιμότητας μεταξύ των κουνουπιών σε κλουβιά στον θάλαμο PG. Η μέθοδος διπλού κλουβιού μας παρέχει οκτώ φορές υψηλότερη απόδοση από τη μέθοδο ελεύθερης πτήσης, επιτρέποντας την ταυτόχρονη δοκιμή διαφορετικών στελεχών κουνουπιών και την αποτελεσματική διάκριση μεταξύ ευαίσθητων και ανθεκτικών πληθυσμών κουνουπιών που εξετάζονται παράλληλα.
Μέχρι σήμερα, τα εντομοκτόνα αεροζόλ έχουν χρησιμοποιηθεί κυρίως στο σπίτι για προσωπική προστασία, με περιορισμένη χρήση σε προγράμματα δημόσιας υγείας. Ωστόσο, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει εκτεταμένη χρήση εντομοκτόνων σε οικιακές περιοχές όπου επικρατούν ασθένειες που μεταδίδονται μέσω φορέων. Είτε το κίνητρο είναι η απωθητική δράση των κουνουπιών είτε η πρόληψη ασθενειών, υπάρχει πιεστική ανάγκη για τυποποιημένες και εύχρηστες μεθόδους για τον έλεγχο των ενδημικών πληθυσμών κουνουπιών για ευαισθησία στα οικιακά εντομοκτόνα. Αυτό είναι κρίσιμο για την πρόβλεψη της αποτελεσματικότητας των εντομοκτόνων έναντι των τοπικών φορέων και την κατανόηση του τρόπου με τον οποίο η χρήση οικιακών εντομοκτόνων επηρεάζει την εξελικτική επιλογή για αντοχή στα εντομοκτόνα.
Η Συμπληρωματική Μέθοδος 1 παρέχει λεπτομερείς οδηγίες βήμα προς βήμα για τη διεξαγωγή του προγράμματος δοκιμών εντομοκτόνων αερολυμάτων.
Παρόλο που οι οδηγίες του ΠΟΥ συνιστούν τη χρήση αυτόματων νεφελοποιητών, δεν παρέχουν συγκεκριμένες τεχνικές προδιαγραφές. Η χρήση αυτόματων νεφελοποιητών είναι ζωτικής σημασίας, καθώς η χειροκίνητη νεφελοποίηση σε θάλαμο προπυλενογλυκόλης δεν είναι μόνο επίπονη, αλλά μπορεί επίσης να προκαλέσει χωρικές ασυνέπειες και διακυμάνσεις στη διάρκεια της νεφελοποίησης.
Ο θάλαμος αντίδρασης πρέπει να αποστειρώνεται μετά από κάθε δοκιμή, αλλά η μέθοδος εσωτερικού καθαρισμού που συνιστάται στις κατευθυντήριες γραμμές του ΠΟΥ περιλαμβάνει την εφαρμογή νερού από έναν εύκαμπτο σωλήνα. Στην καθημερινή μας εργασία, αυτή η μέθοδος είναι το πιο επίπονο βήμα στη λειτουργία του βιοαναλυτικού εξοπλισμού, γι' αυτό αναπτύξαμε και δοκιμάσαμε μια διαδικασία αποστείρωσης με βάση το στυλεό.
Τα αφαιρούμενα μέρη του ανεμιστήρα υποβάλλονται σε επεξεργασία όπως περιγράφεται παραπάνω και τα πτερύγια και το πλαίσιο του ανεμιστήρα καθαρίζονται με ένα σφουγγάρι εμποτισμένο σε διάλυμα 5% Decon 90.
Με βάση τη σχέση μεταξύ της διάρκειας ψεκασμού και του ρυθμού χορήγησης του προϊόντος, ο διανομέας αεροζόλ μας επέδειξε επίσης καλή ακρίβεια στον έλεγχο της αναλογίας δοσολογίας αεροζόλ, τουλάχιστον στο εύρος δοκιμής από 1 έως 4 φορές. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3β, αυτό το χαρακτηριστικό είναι ιδιαίτερα σημαντικό για τον χαρακτηρισμό της σχέσης δόσης-απόκρισης νέων σκευασμάτων αεροζόλ ή για τον προσδιορισμό της δόσης αναγνώρισης για την ανίχνευση αντοχής στα εντομοκτόνα.
Δείχνουμε ότι το αναθεωρημένο πρωτόκολλό μας για την αξιολόγηση οικιακών εντομοκτόνων αερολυμάτων, χρησιμοποιώντας απολύμανση με μπατονέτα, διπλά κλουβιά, τηλεχειριζόμενους ψεκαστήρες και βιομετρική καταγραφή από κάμερες δράσης, αποτελεί μια πιο αποτελεσματική και εφικτή εναλλακτική λύση σε σχέση με την τρέχουσαΠΟΥσυστάσεις. Η μέθοδος απολύμανσης με στυλεό, που απαιτεί μόνο 20 λεπτά, εξοικονομεί σημαντικά χρόνο σε σύγκριση με το υπάρχον πρωτόκολλο (το οποίο συνήθως απαιτεί μία ώρα ανά θάλαμο δοκιμών). Μειώνει επίσης τον χρόνο που αφιερώνουν οι χειριστές φορώντας πλήρη ατομικό προστατευτικό εξοπλισμό (π.χ. αναπνευστικά κράνη και αντιστατικά ρούχα εργασίας). Επιπλέον, αυτή η μέθοδος παράγει λιγότερο μολυσμένο υγρό και ρούχα για επεξεργασία από έναν πλήρη καθαρισμό του θαλάμου δοκιμών, ελαχιστοποιώντας έτσι την πιθανότητα μόλυνσης του δωματίου που στεγάζει τον θάλαμο δοκιμών. Η μέθοδος απολύμανσης με στυλεό είναι επίσης κατάλληλη για την απολύμανση ημιμόνιμων δωματίων δοκιμών που απαιτούνελάχιστοςΤοποθέτηση επίπλων σε μια ποικιλία διαρρυθμίσεων δωματίων.
Ένα βασικό ζήτημα που διερευνήθηκε σε αυτήν τη μελέτη και σε άλλες είναι η τυποποίηση των δόσεων έκθεσης σε εντομοκτόνα που εφαρμόζονται στο περιβάλλον σε διαφορετικά πρωτόκολλα δοκιμών. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2β, παρά τη σταθερή διάρκεια ψεκασμού, ο όγκος ψεκασμού ποικίλλει μεταξύ των τύπων δοχείων αερολύματος, πιθανώς αντανακλώντας διαφορές στις διαδικασίες κατασκευής (π.χ., εσωτερική πίεση, χρήση προωθητικού, δομή ακροφυσίου κ.λπ.). Επιπλέον, η τρέχουσα έλλειψη εμπορικά διαθέσιμων συσκευών τηλεψεκασμού με την απαιτούμενη ευελιξία στη διάρκεια ψεκασμού περιορίζει τη χρήση τους στην αξιολόγηση της σχέσης δόσης-απόκρισης για τον έλεγχο των κουνουπιών. Ο χειροκίνητος ψεκασμός μέσω δοκιμαστικών καταπακτών ή καταπακτών πρόσβασης (εάν υπάρχουν) μπορεί να οδηγήσει σε διακυμάνσεις στις δόσεις έκθεσης. Στην πραγματικότητα, τα αποτελέσματά μας υπογραμμίζουν την ανάγκη και τη σημασία της μείωσης αυτών των πηγών διακύμανσης. Για τους ανθεκτικούς πληθυσμούς Aedes aegypti, παρατηρήσαμε μια συσχέτιση μεταξύ της δόσης αερολύματος και του τελικού προσδιορισμού της ευαισθησίας ή της αντοχής (Σχήμα 3β). Ιδανικά, οι δόσεις αερολύματος θα πρέπει να τυποποιούνται σε γραμμάρια αερολυμένης ουσίας και όχι στη διάρκεια της αερολύματος, για να διευκολυνθούν οι συγκρίσεις μεταξύ διαφορετικών μελετών.
Το RCAD προσφέρει μια εναλλακτική προσέγγιση για μελλοντική έρευνα που ελαχιστοποιεί τον αντίκτυπο των διακυμάνσεων της διαδικασίας. Παρόλο που διαπιστώσαμε ότι η τυποποίηση των ψεκασμών αερολύματος δεν είναι εφικτή, καταδείξαμε ότι η μάζα του αερολύματος που παρέχεται μέσω διαφορετικών δοχείων αερολύματος μπορεί να εκτιμηθεί αναπαραγώγιμα βαθμονομώντας το μήκος ψεκασμού (Σχήματα 2β, 3α). Αυτή η τυποποίηση της συγκέντρωσης αερολύματος σε οποιονδήποτε θάλαμο δοκιμής είναι κρίσιμη για τη βελτίωση της αναπαραγωγιμότητας των αποτελεσμάτων.
Με βάση την εμπειρία μας και αυτήν άλλων ερευνητικών ομάδων, οι συστάσεις που περιέχονται στην τρέχουσα Οδηγία σχετικά με τη χρήση μεθόδων ανίχνευσης αερολυμάτων για τον έλεγχο κουνουπιών που πετούν ελεύθερα θέτουν σημαντικές υλικοτεχνικές προκλήσεις για εργαστηριακές και ημι-πεδιακές μελέτες. Για παράδειγμα, οι μέθοδοι ανίχνευσης κουνουπιών που πετούν ελεύθερα έχουν πολύ χαμηλή απόδοση (συμπεριλαμβανομένης της απαιτητικής εργασίας για την ανασύλληψη των επιζώντων κουνουπιών που πετούν ελεύθερα) και υποφέρουν από διάφορους τεχνικούς περιορισμούς, όπως δυσκολίες στον προσδιορισμό των ποσοστών θανάτωσης σε πραγματικό χρόνο.
Παρόλο που το επικυρωμένο πείραμά μας με διπλό κλουβί αντιμετωπίζει το ζήτημα των περιορισμών ροής και αποτελεί μια εφικτή μέθοδο για τον έλεγχο της ευαισθησίας των κουνουπιών στα εντομοκτόνα αερολυμάτων, θα πρέπει να σημειωθεί ότι τα ποσοστά θνησιμότητας των κουνουπιών των Νήσων Κέιμαν ήταν σημαντικά χαμηλότερα στο πείραμα κλουβιού σε σχέση με το πείραμα ελεύθερης πτήσης (Εικ. 5γ, Πίνακας 1). Αυτή η διαφορά μπορεί να αντανακλά μια μείωση στη δόση του εντομοκτόνου μέσα στο κλουβί, καθώς λιγότερα σταγονίδια αερολύματος διεισδύουν στο πλέγμα και εισέρχονται στο κλουβί. Μελλοντικές μελέτες θα μπορούσαν να χρησιμοποιήσουν υφάσματα μεγαλύτερου πλέγματος και σχέδια κλουβιών με υψηλότερους ρυθμούς ροής αέρα από ανεμιστήρα (π.χ., κυλινδρικά σχέδια) για την περαιτέρω επικύρωση των αποτελεσμάτων που ελήφθησαν με τις διαφορετικές πειραματικές μεθόδους.
Ώρα δημοσίευσης: 02 Φεβρουαρίου 2026