Σε ένα προηγούμενο έργο που εξέταζε τοπικά εργοστάσια επεξεργασίας τροφίμων για κουνούπια στην Ταϊλάνδη, τα αιθέρια έλαια (EOs) του Cyperus rotundus, της γκαλάνγκαλ και της κανέλας βρέθηκαν να έχουν καλή αντικουνουπική δράση κατά του Aedes aegypti. Σε μια προσπάθεια μείωσης της χρήσης παραδοσιακώνεντομοκτόνακαι για τη βελτίωση του ελέγχου των ανθεκτικών πληθυσμών κουνουπιών, η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο να εντοπίσει την πιθανή συνέργεια μεταξύ των ενηλικοκτονικών επιδράσεων του οξειδίου του αιθυλενίου και της τοξικότητας της περμεθρίνης στα κουνούπια Aedes aegypti, συμπεριλαμβανομένων των ανθεκτικών και ευαίσθητων στα πυρεθροειδή στελεχών.
Για την αξιολόγηση της χημικής σύνθεσης και της δράσης θανάτωσης του EO που εξάγεται από ριζώματα των C. rotundus και A. galanga και φλοιό του C. verum έναντι του ευαίσθητου στελέχους Muang Chiang Mai (MCM-S) και του ανθεκτικού στελέχους Pang Mai Dang (PMD-R). ) Ενήλικα ενεργά στελέχη Ae. Aedes aegypti. Πραγματοποιήθηκε επίσης βιοδοκιμασία ενηλίκων του μείγματος EO-περμεθρίνης σε αυτά τα κουνούπια Aedes για να κατανοηθεί η συνεργιστική του δράση. στελέχη aegypti.
Ο χημικός χαρακτηρισμός χρησιμοποιώντας την αναλυτική μέθοδο GC-MS έδειξε ότι 48 ενώσεις ταυτοποιήθηκαν από τα EOs των C. rotundus, A. galanga και C. verum, αντιπροσωπεύοντας το 80,22%, 86,75% και 97,24% του συνόλου των συστατικών, αντίστοιχα. Το κυπερένιο (14,04%), το β-βισαβολένιο (18,27%) και η κινναμαλδεΰδη (64,66%) είναι τα κύρια συστατικά του ελαίου cyperus, του ελαίου galangal και του βαλσαμικού ελαίου, αντίστοιχα. Σε βιολογικές δοκιμασίες θανάτωσης ενηλίκων, τα EVs των C. rotundus, A. galanga και C. verum ήταν αποτελεσματικά στη θανάτωση των Ae. aegypti, MCM-S και PMD-R. Οι τιμές LD50 ήταν 10,05 και 9,57 μg/mg θηλυκών, 7,97 και 7,94 μg/mg θηλυκών και 3,30 και 3,22 μg/mg θηλυκών, αντίστοιχα. Η αποτελεσματικότητα της MCM-S και της PMD-R Ae στη θανάτωση ενήλικων κουνουπιών aegypti σε αυτά τα EO ήταν κοντά στο πιπερονυλοβουτοξείδιο (τιμές PBO, LD50 = 6,30 και 4,79 μg/mg θηλυκών, αντίστοιχα), αλλά όχι τόσο έντονη όσο της περμεθρίνης (τιμές LD50 = 0,44 και 3,70 ng/mg θηλυκών αντίστοιχα). Ωστόσο, συνδυαστικές βιοδοκιμασίες βρήκαν συνέργεια μεταξύ EO και περμεθρίνης. Σημαντική συνέργεια με την περμεθρίνη έναντι δύο στελεχών κουνουπιών Aedes. Παρατηρήθηκε Aedes aegypti στο EM των C. rotundus και A. galanga. Η προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga μείωσε σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης στο MCM-S από 0,44 σε 0,07 ng/mg και 0,11 ng/mg στα θηλυκά, αντίστοιχα, με τιμές λόγου συνέργειας (SR) 6,28 και 4,00 αντίστοιχα. Επιπλέον, τα αιθέρια έλαια C. rotundus και A. galanga μείωσαν επίσης σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης στο PMD-R από 3,70 σε 0,42 ng/mg και 0,003 ng/mg στα θηλυκά, αντίστοιχα, με τιμές SR 8,81 και 1233,33, αντίστοιχα.
Συνεργιστική δράση ενός συνδυασμού EO-περμεθρίνης για την ενίσχυση της τοξικότητας σε ενήλικες έναντι δύο στελεχών κουνουπιών Aedes. Το Aedes aegypti καταδεικνύει έναν πολλά υποσχόμενο ρόλο για το οξείδιο του αιθυλενίου ως συνεργιστικό στην ενίσχυση της αποτελεσματικότητας κατά των κουνουπιών, ειδικά όταν οι παραδοσιακές ενώσεις είναι αναποτελεσματικές ή ακατάλληλες.
Το κουνούπι Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) είναι ο κύριος φορέας του δάγκειου πυρετού και άλλων μολυσματικών ιογενών ασθενειών όπως ο κίτρινος πυρετός, ο ιός chikungunya και ο ιός Zika, αποτελώντας μια τεράστια και επίμονη απειλή για τον άνθρωπο [1, 2]. Ο ιός του δάγκειου πυρετού είναι ο πιο σοβαρός παθογόνος αιμορραγικός πυρετός που επηρεάζει τους ανθρώπους, με εκτιμώμενα 5-100 εκατομμύρια κρούσματα ετησίως και περισσότερους από 2,5 δισεκατομμύρια ανθρώπους παγκοσμίως σε κίνδυνο [3]. Τα κρούσματα αυτής της μολυσματικής ασθένειας επιβαρύνουν σημαντικά τους πληθυσμούς, τα συστήματα υγείας και τις οικονομίες των περισσότερων τροπικών χωρών [1]. Σύμφωνα με το Υπουργείο Υγείας της Ταϊλάνδης, το 2015 καταγράφηκαν 142.925 κρούσματα δάγκειου πυρετού και 141 θάνατοι σε εθνικό επίπεδο, αριθμός υπερτριπλάσιος από τον αριθμό των κρουσμάτων και των θανάτων το 2014 [4]. Παρά τα ιστορικά στοιχεία, ο δάγκειος πυρετός έχει εξαλειφθεί ή μειωθεί σημαντικά από το κουνούπι Aedes. Μετά τον έλεγχο του Aedes aegypti [5], τα ποσοστά μόλυνσης αυξήθηκαν δραματικά και η ασθένεια εξαπλώθηκε σε όλο τον κόσμο, εν μέρει λόγω δεκαετιών υπερθέρμανσης του πλανήτη. Η εξάλειψη και ο έλεγχος του Ae. Aedes aegypti είναι σχετικά δύσκολος, επειδή είναι ένα οικόσιτο κουνούπι-φορέας που ζευγαρώνει, τρέφεται, ξεκουράζεται και γεννά αυγά μέσα και γύρω από την ανθρώπινη κατοικία κατά τη διάρκεια της ημέρας. Επιπλέον, αυτό το κουνούπι έχει την ικανότητα να προσαρμόζεται στις περιβαλλοντικές αλλαγές ή τις διαταραχές που προκαλούνται από φυσικά φαινόμενα (όπως η ξηρασία) ή από ανθρώπινα μέτρα ελέγχου και μπορεί να επιστρέψει στους αρχικούς του αριθμούς [6, 7]. Επειδή τα εμβόλια κατά του δάγκειου πυρετού έχουν εγκριθεί μόλις πρόσφατα και δεν υπάρχει ειδική θεραπεία για τον δάγκειο πυρετό, η πρόληψη και η μείωση του κινδύνου μετάδοσης του δάγκειου πυρετού εξαρτάται αποκλειστικά από τον έλεγχο των κουνουπιών-φορέων και την εξάλειψη της ανθρώπινης επαφής με τους φορείς.
Συγκεκριμένα, η χρήση χημικών ουσιών για τον έλεγχο των κουνουπιών παίζει πλέον σημαντικό ρόλο στη δημόσια υγεία ως σημαντικό στοιχείο της ολοκληρωμένης διαχείρισης των φορέων. Οι πιο δημοφιλείς χημικές μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρήση εντομοκτόνων χαμηλής τοξικότητας που δρουν κατά των προνυμφών κουνουπιών (προνυμφοκτόνα) και των ενήλικων κουνουπιών (αδιδοκτόνα). Ο έλεγχος των προνυμφών μέσω της μείωσης της πηγής και της τακτικής χρήσης χημικών προνυμφοκτόνων όπως οργανοφωσφορικά και ρυθμιστές ανάπτυξης εντόμων θεωρείται σημαντικός. Ωστόσο, οι δυσμενείς περιβαλλοντικές επιπτώσεις που σχετίζονται με τα συνθετικά φυτοφάρμακα και η απαιτητική σε εργασία και πολύπλοκη συντήρησή τους παραμένουν μια σημαντική ανησυχία [8, 9]. Ο παραδοσιακός ενεργός έλεγχος φορέων, όπως ο έλεγχος των ενήλικων, παραμένει το πιο αποτελεσματικό μέσο ελέγχου κατά τη διάρκεια ιογενών επιδημιών, επειδή μπορεί να εξαλείψει τους φορείς μολυσματικών ασθενειών γρήγορα και σε μεγάλη κλίμακα, καθώς και να μειώσει τη διάρκεια ζωής και τη μακροζωία των τοπικών πληθυσμών φορέων [3], 10]. Τέσσερις κατηγορίες χημικών εντομοκτόνων: τα οργανοχλωρίδια (αναφέρονται μόνο ως DDT), τα οργανοφωσφορικά, τα καρβαμιδικά και τα πυρεθροειδή αποτελούν τη βάση των προγραμμάτων ελέγχου φορέων, με τα πυρεθροειδή να θεωρούνται η πιο επιτυχημένη κατηγορία. Είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικά έναντι διαφόρων αρθρόποδων και έχουν χαμηλή τοξικότητα στα θηλαστικά. Επί του παρόντος, τα συνθετικά πυρεθροειδή αποτελούν την πλειονότητα των εμπορικών φυτοφαρμάκων, αντιπροσωπεύοντας περίπου το 25% της παγκόσμιας αγοράς φυτοφαρμάκων [11, 12]. Η περμεθρίνη και η δελταμεθρίνη είναι πυρεθροειδή εντομοκτόνα ευρέος φάσματος που χρησιμοποιούνται παγκοσμίως εδώ και δεκαετίες για τον έλεγχο μιας ποικιλίας παρασίτων γεωργικής και ιατρικής σημασίας [13, 14]. Τη δεκαετία του 1950, το DDT επιλέχθηκε ως η χημική ουσία επιλογής για το εθνικό πρόγραμμα καταπολέμησης κουνουπιών δημόσιας υγείας της Ταϊλάνδης. Μετά την ευρεία χρήση του DDT σε περιοχές ενδημικές για την ελονοσία, η Ταϊλάνδη σταδιακά κατάργησε τη χρήση του DDT μεταξύ 1995 και 2000 και το αντικατέστησε με δύο πυρεθροειδή: την περμεθρίνη και τη δελταμεθρίνη [15, 16]. Αυτά τα πυρεθροειδή εντομοκτόνα εισήχθησαν στις αρχές της δεκαετίας του 1990 για τον έλεγχο της ελονοσίας και του δάγκειου πυρετού, κυρίως μέσω αγωγών με κουνουπιέρες και της χρήσης θερμικών ομίχλης και ψεκασμών εξαιρετικά χαμηλής τοξικότητας [14, 17]. Ωστόσο, έχουν χάσει την αποτελεσματικότητά τους λόγω της ισχυρής αντοχής στα κουνούπια και της έλλειψης συμμόρφωσης του κοινού λόγω ανησυχιών για τη δημόσια υγεία και τις περιβαλλοντικές επιπτώσεις των συνθετικών χημικών ουσιών. Αυτό θέτει σημαντικές προκλήσεις για την επιτυχία των προγραμμάτων ελέγχου των φορέων απειλής [14, 18, 19]. Για να καταστεί η στρατηγική πιο αποτελεσματική, είναι απαραίτητα έγκαιρα και κατάλληλα αντίμετρα. Οι συνιστώμενες διαδικασίες διαχείρισης περιλαμβάνουν την αντικατάσταση φυσικών ουσιών, την εναλλαγή χημικών ουσιών διαφορετικών κατηγοριών, την προσθήκη συνεργιστικών και την ανάμειξη χημικών ουσιών ή την ταυτόχρονη εφαρμογή χημικών ουσιών διαφορετικών κατηγοριών [14, 20, 21]. Επομένως, υπάρχει επείγουσα ανάγκη να βρεθεί και να αναπτυχθεί μια φιλική προς το περιβάλλον, βολική και αποτελεσματική εναλλακτική λύση και συνεργιστικό και η παρούσα μελέτη στοχεύει να αντιμετωπίσει αυτήν την ανάγκη.
Τα εντομοκτόνα φυσικής προέλευσης, ειδικά αυτά που βασίζονται σε φυτικά συστατικά, έχουν δείξει δυνατότητες στην αξιολόγηση τρεχουσών και μελλοντικών εναλλακτικών λύσεων ελέγχου κουνουπιών [22, 23, 24]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι είναι δυνατό να ελεγχθούν σημαντικοί φορείς κουνουπιών χρησιμοποιώντας φυτικά προϊόντα, ιδιαίτερα αιθέρια έλαια (EOs), ως ενήλικα φονικά. Ενήλικα σκευάσματα έχουν βρεθεί σε πολλά φυτικά έλαια όπως σέλινο, κύμινο, ζεδοάρια, γλυκάνισο, πιπεριά, θυμάρι, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata και Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Το οξείδιο του αιθυλενίου χρησιμοποιείται πλέον όχι μόνο μόνο του, αλλά και σε συνδυασμό με εκχυλισμένες φυτικές ουσίες ή υπάρχοντα συνθετικά φυτοφάρμακα, παράγοντας ποικίλους βαθμούς τοξικότητας. Οι συνδυασμοί παραδοσιακών εντομοκτόνων όπως οργανοφωσφορικά, καρβαμιδικά και πυρεθροειδή με οξείδιο του αιθυλενίου/φυτικά εκχυλίσματα δρουν συνεργιστικά ή ανταγωνιστικά στις τοξικές τους επιδράσεις και έχουν αποδειχθεί αποτελεσματικοί έναντι φορέων ασθενειών και παρασίτων [31,32,33,34,35]. Ωστόσο, οι περισσότερες μελέτες σχετικά με τις συνεργιστικές τοξικές επιδράσεις συνδυασμών φυτοχημικών με ή χωρίς συνθετικές χημικές ουσίες έχουν διεξαχθεί σε γεωργικά έντομα-φορείς και παράσιτα και όχι σε ιατρικά σημαντικά κουνούπια. Επιπλέον, το μεγαλύτερο μέρος της εργασίας σχετικά με τις συνεργιστικές επιδράσεις συνδυασμών φυτοσυνθετικών εντομοκτόνων κατά των φορέων κουνουπιών έχει επικεντρωθεί στην προνυμφοκτόνο δράση.
Σε μια προηγούμενη μελέτη που διεξήχθη από τους συγγραφείς στο πλαίσιο ενός συνεχιζόμενου ερευνητικού έργου που εξέταζε απωθητικά από αυτόχθονα φυτά τροφίμων στην Ταϊλάνδη, τα οξείδια του αιθυλενίου από το Cyperus rotundus, τη γαλανγκάλη και την κανέλα βρέθηκαν να έχουν πιθανή δράση έναντι των ενήλικων Aedes. Αίγυπτος [36]. Επομένως, η παρούσα μελέτη στόχευε στην αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των αιθέριων οξέων που απομονώθηκαν από αυτά τα φαρμακευτικά φυτά έναντι των κουνουπιών Aedes. aegypti, συμπεριλαμβανομένων των ανθεκτικών και ευαίσθητων στα πυρεθροειδή στελεχών. Η συνεργιστική δράση δυαδικών μιγμάτων οξειδίου του αιθυλενίου και συνθετικών πυρεθροειδών με καλή αποτελεσματικότητα σε ενήλικες έχει επίσης αναλυθεί για τη μείωση της χρήσης παραδοσιακών εντομοκτόνων και την αύξηση της αντοχής στα κουνούπια-φορείς, ειδικά έναντι του Aedes. Aedes aegypti. Αυτό το άρθρο αναφέρει τον χημικό χαρακτηρισμό αποτελεσματικών αιθέριων ελαίων και τη δυνατότητά τους να ενισχύσουν την τοξικότητα της συνθετικής περμεθρίνης έναντι των κουνουπιών Aedes. aegypti σε στελέχη ευαίσθητα στα πυρεθροειδή (MCM-S) και ανθεκτικά στελέχη (PMD-R).
Τα ριζώματα των C. rotundus και A. galanga και ο φλοιός του C. verum (Εικ. 1) που χρησιμοποιούνται για την εξαγωγή αιθέριων ελαίων αγοράστηκαν από προμηθευτές φυτικών φαρμάκων στην επαρχία Chiang Mai της Ταϊλάνδης. Η επιστημονική ταυτοποίηση αυτών των φυτών επιτεύχθηκε μέσω διαβούλευσης με τον κ. James Franklin Maxwell, Βοτανολόγο Βοτανικών, Τμήμα Βιολογίας, Κολλέγιο Επιστημών, Πανεπιστήμιο Chiang Mai (CMU), Επαρχία Chiang Mai, Ταϊλάνδη, και τον επιστήμονα Wannari Charoensap. Στο Τμήμα Φαρμακευτικής, Κολλέγιο Φαρμακευτικής, Πανεπιστήμιο Carnegie Mellon, δείγματα της κας Voucher από κάθε φυτό φυλάσσονται στο Τμήμα Παρασιτολογίας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Carnegie Mellon για μελλοντική χρήση.
Τα δείγματα φυτών ξηράνθηκαν μεμονωμένα σε σκιά για 3-5 ημέρες σε ανοιχτό χώρο με ενεργό αερισμό και θερμοκρασία περιβάλλοντος περίπου 30 ± 5 °C για την απομάκρυνση της περιεχόμενης υγρασίας πριν από την εκχύλιση των φυσικών αιθέριων ελαίων (EOs). Συνολικά 250 g κάθε ξηρού φυτικού υλικού αλέστηκαν μηχανικά σε χονδρή σκόνη και χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση αιθέριων ελαίων (EOs) με απόσταξη με ατμό. Η συσκευή απόσταξης αποτελούνταν από έναν ηλεκτρικό μανδύα θέρμανσης, μια σφαιρική φιάλη 3000 mL, μια στήλη εκχύλισης, έναν συμπυκνωτή και μια συσκευή Cool Ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Τόκιο, Ιαπωνία). Προσθέστε 1600 ml απεσταγμένο νερό και 10-15 γυάλινες χάντρες στη φιάλη και στη συνέχεια θερμάνετέ την στους περίπου 100°C χρησιμοποιώντας ηλεκτρικό θερμαντήρα για τουλάχιστον 3 ώρες μέχρι να ολοκληρωθεί η απόσταξη και να μην παράγεται άλλο EO. Το στρώμα EO διαχωρίστηκε από την υδατική φάση χρησιμοποιώντας διαχωριστική χοάνη, ξηράνθηκε πάνω από άνυδρο θειικό νάτριο (Na2SO4) και αποθηκεύτηκε σε σφραγισμένη καφέ φιάλη στους 4°C μέχρι να εξεταστεί η χημική σύνθεση και η δραστικότητα του ενήλικα.
Η χημική σύνθεση των αιθέριων ελαίων πραγματοποιήθηκε ταυτόχρονα με τη βιοδοκιμασία για την ενήλικη ουσία. Η ποιοτική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα GC-MS που αποτελείται από έναν αέριο χρωματογράφο Hewlett-Packard (Wilmington, CA, ΗΠΑ) 7890A εξοπλισμένο με έναν τετραπολικό ανιχνευτή επιλεκτικής μάζας (Agilent Technologies, Wilmington, CA, ΗΠΑ) και έναν MSD 5975C (EI). (Agilent Technologies).
Χρωματογραφική στήλη – DB-5MS (30 m × Εσωτερική διάμετρος 0,25 mm × πάχος μεμβράνης 0,25 µm). Ο συνολικός χρόνος εκτέλεσης της GC-MS ήταν 20 λεπτά. Οι συνθήκες ανάλυσης είναι ότι οι θερμοκρασίες του εγχυτήρα και της γραμμής μεταφοράς είναι 250 και 280 °C, αντίστοιχα. η θερμοκρασία του κλιβάνου έχει ρυθμιστεί να αυξάνεται από 50°C σε 250°C με ρυθμό 10°C/min, το αέριο φορέας είναι ήλιο. ρυθμός ροής 1,0 ml/min. ο όγκος έγχυσης είναι 0,2 µL (1/10% κατ' όγκο σε CH2Cl2, λόγος διαχωρισμού 100:1). Για την ανίχνευση GC-MS χρησιμοποιείται σύστημα ιονισμού ηλεκτρονίων με ενέργεια ιονισμού 70 eV. Το εύρος λήψης είναι 50–550 ατομικές μονάδες μάζας (amu) και η ταχύτητα σάρωσης είναι 2,91 σαρώσεις ανά δευτερόλεπτο. Τα σχετικά ποσοστά των συστατικών εκφράζονται ως ποσοστά κανονικοποιημένα με βάση την περιοχή της κορυφής. Η ταυτοποίηση των συστατικών των αιθανολικών ενώσεων βασίζεται στον δείκτη κατακράτησης (RI). Ο RI υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την εξίσωση των Van den Dool και Kratz [37] για τη σειρά n-αλκανίων (C8-C40) και συγκρίθηκε με δείκτες κατακράτησης από τη βιβλιογραφία [38] και βάσεις δεδομένων βιβλιοθηκών (NIST 2008 και Wiley 8NO8). Η ταυτότητα των ενώσεων που παρουσιάζονται, όπως η δομή και ο μοριακός τύπος, επιβεβαιώθηκε με σύγκριση με διαθέσιμα αυθεντικά δείγματα.
Τα αναλυτικά πρότυπα για τη συνθετική περμεθρίνη και το πιπερονυλοβουτοξείδιο (PBO, θετικός έλεγχος σε μελέτες συνέργειας) αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ΗΠΑ). Τα κιτ δοκιμών ενηλίκων του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ) και οι διαγνωστικές δόσεις χαρτιού εμποτισμένου με περμεθρίνη (0,75%) αγοράστηκαν εμπορικά από το Κέντρο Ελέγχου Φορέων του ΠΟΥ στην Πενάνγκ της Μαλαισίας. Όλες οι άλλες χημικές ουσίες και αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής καθαρότητας και αγοράστηκαν από τοπικά ιδρύματα στην επαρχία Τσιάνγκ Μάι της Ταϊλάνδης.
Τα κουνούπια που χρησιμοποιήθηκαν ως οργανισμοί δοκιμής στην ενήλικη βιοδοκιμασία ήταν ελεύθερα ζευγαρωμένα εργαστηριακά κουνούπια Aedes aegypti, συμπεριλαμβανομένου του ευαίσθητου στελέχους Muang Chiang Mai (MCM-S) και του ανθεκτικού στελέχους Pang Mai Dang (PMD-R). Το στέλεχος MCM-S ελήφθη από τοπικά δείγματα που συλλέχθηκαν στην περιοχή Muang Chiang Mai, στην επαρχία Chiang Mai της Ταϊλάνδης, και διατηρείται στην αίθουσα εντομολογίας του Τμήματος Παρασιτολογίας, στην Ιατρική Σχολή CMU, από το 1995 [39]. Το στέλεχος PMD-R, το οποίο βρέθηκε ανθεκτικό στην περμεθρίνη, απομονώθηκε από κουνούπια αγρού που συλλέχθηκαν αρχικά από το Ban Pang Mai Dang, στην περιοχή Mae Tang, στην επαρχία Chiang Mai της Ταϊλάνδης, και διατηρείται στο ίδιο ινστιτούτο από το 1997 [40]. Τα στελέχη PMD-R αναπτύχθηκαν υπό επιλεκτική πίεση για τη διατήρηση των επιπέδων αντοχής με διαλείπουσα έκθεση σε 0,75% περμεθρίνη χρησιμοποιώντας το κιτ ανίχνευσης του ΠΟΥ με ορισμένες τροποποιήσεις [41]. Κάθε στέλεχος του Ae. Τα Aedes aegypti αποικίστηκαν μεμονωμένα σε εργαστήριο απαλλαγμένο από παθογόνα στους 25 ± 2 °C και σχετική υγρασία 80 ± 10% και φωτοπερίοδο φωτός/σκότους 14:10 ωρών. Περίπου 200 προνύμφες διατηρήθηκαν σε πλαστικούς δίσκους (μήκους 33 cm, πλάτους 28 cm και ύψους 9 cm) γεμάτους με νερό βρύσης σε πυκνότητα 150-200 προνύμφες ανά δίσκο και τρέφονταν δύο φορές την ημέρα με αποστειρωμένα μπισκότα για σκύλους. Τα ενήλικα σκουλήκια διατηρήθηκαν σε υγρά κλουβιά και τρέφονταν συνεχώς με υδατικό διάλυμα σακχαρόζης 10% και διάλυμα σιροπιού πολυβιταμινών 10%. Τα θηλυκά κουνούπια ρουφούν τακτικά αίμα για να γεννήσουν αυγά. Τα θηλυκά ηλικίας δύο έως πέντε ημερών που δεν έχουν τραφεί με αίμα μπορούν να χρησιμοποιηθούν συνεχώς σε πειραματικές βιολογικές δοκιμασίες ενηλίκων.
Μια βιοδοκιμασία απόκρισης δόσης-θνησιμότητας του EO πραγματοποιήθηκε σε ενήλικα θηλυκά κουνούπια Aedes, aegypti, MCM-S και PMD-R χρησιμοποιώντας μια τοπική μέθοδο τροποποιημένη σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο του ΠΟΥ για δοκιμές ευαισθησίας [42]. Το EO από κάθε φυτό αραιώθηκε σειριακά με κατάλληλο διαλύτη (π.χ. αιθανόλη ή ακετόνη) για να ληφθεί μια διαβαθμισμένη σειρά 4-6 συγκεντρώσεων. Μετά την αναισθησία με διοξείδιο του άνθρακα (CO2), τα κουνούπια ζυγίστηκαν ξεχωριστά. Τα αναισθητοποιημένα κουνούπια στη συνέχεια διατηρήθηκαν ακίνητα σε ξηρό διηθητικό χαρτί σε μια ειδικά σχεδιασμένη ψυχρή πλάκα υπό στερεομικροσκόπιο για να αποφευχθεί η επανενεργοποίηση κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Για κάθε θεραπεία, 0,1 μl διαλύματος EO εφαρμόστηκε στο άνω πρόνωτο του θηλυκού χρησιμοποιώντας έναν φορητό μικροδιανομέα Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, ΗΠΑ). Είκοσι πέντε θηλυκά υποβλήθηκαν σε θεραπεία με κάθε συγκέντρωση, με θνησιμότητα που κυμαινόταν από 10% έως 95% για τουλάχιστον 4 διαφορετικές συγκεντρώσεις. Τα κουνούπια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με διαλύτη χρησίμευσαν ως έλεγχος. Για να αποτρέψετε τη μόλυνση των δειγμάτων δοκιμής, αντικαταστήστε το χαρτί φίλτρου με νέο χαρτί φίλτρου για κάθε εξεταζόμενο EO. Οι δόσεις που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις βιολογικές δοκιμασίες εκφράζονται σε μικρογραμμάρια EO ανά χιλιοστόγραμμο σωματικού βάρους ζωντανού θηλυκού. Η δραστικότητα του PBO των ενηλίκων αξιολογήθηκε επίσης με παρόμοιο τρόπο με το EO, με το PBO να χρησιμοποιείται ως θετικός έλεγχος σε συνεργιστικά πειράματα. Τα κουνούπια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία σε όλες τις ομάδες τοποθετήθηκαν σε πλαστικά κύπελλα και τους δόθηκε 10% σακχαρόζη συν 10% σιρόπι πολυβιταμινών. Όλες οι βιολογικές δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν στους 25 ± 2 °C και 80 ± 10% σχετική υγρασία και επαναλήφθηκαν τέσσερις φορές με τους μάρτυρες. Η θνησιμότητα κατά τη διάρκεια της 24ωρης περιόδου εκτροφής ελέγχθηκε και επιβεβαιώθηκε από την έλλειψη απόκρισης του κουνουπιού σε μηχανική διέγερση και στη συνέχεια καταγράφηκε με βάση τον μέσο όρο τεσσάρων επαναλήψεων. Οι πειραματικές θεραπείες επαναλήφθηκαν τέσσερις φορές για κάθε δείγμα δοκιμής χρησιμοποιώντας διαφορετικές παρτίδες κουνουπιών. Τα αποτελέσματα συνοψίστηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό του ποσοστού θνησιμότητας, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της 24ωρης θανατηφόρας δόσης με ανάλυση probit.
Η συνεργιστική αντικτόνος δράση του EO και της περμεθρίνης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια διαδικασία τοπικής τοξικότητας [42] όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Χρησιμοποιήστε ακετόνη ή αιθανόλη ως διαλύτη για την παρασκευή περμεθρίνης στην επιθυμητή συγκέντρωση, καθώς και ένα δυαδικό μείγμα EO και περμεθρίνης (EO-περμεθρίνη: περμεθρίνη αναμεμειγμένη με EO σε συγκέντρωση LD25). Τα κιτ δοκιμής (περμεθρίνη και EO-περμεθρίνη) αξιολογήθηκαν έναντι στελεχών MCM-S και PMD-R του Ae. Aedes aegypti. Σε κάθε ένα από τα 25 θηλυκά κουνούπια δόθηκαν τέσσερις δόσεις περμεθρίνης για να ελεγχθεί η αποτελεσματικότητά της στη θανάτωση ενηλίκων, με κάθε θεραπεία να επαναλαμβάνεται τέσσερις φορές. Για τον εντοπισμό υποψήφιων συνεργιστών EO, χορηγήθηκαν 4 έως 6 δόσεις EO-περμεθρίνης σε κάθε ένα από τα 25 θηλυκά κουνούπια, με κάθε εφαρμογή να επαναλαμβάνεται τέσσερις φορές. Η θεραπεία με PBO-περμεθρίνη (περμεθρίνη αναμεμειγμένη με συγκέντρωση LD25 PBO) χρησίμευσε επίσης ως θετικός έλεγχος. Οι δόσεις που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις βιολογικές δοκιμασίες εκφράζονται σε νανογραμμάρια δείγματος δοκιμής ανά χιλιοστόγραμμο σωματικού βάρους ζωντανού θηλυκού. Διεξήχθησαν τέσσερις πειραματικές αξιολογήσεις για κάθε στέλεχος κουνουπιού σε μεμονωμένες εκτρεφόμενες παρτίδες και τα δεδομένα θνησιμότητας συγκεντρώθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Probit για τον προσδιορισμό μιας θανατηφόρας δόσης 24 ωρών.
Το ποσοστό θνησιμότητας προσαρμόστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο Abbott [43]. Τα προσαρμοσμένα δεδομένα αναλύθηκαν με ανάλυση παλινδρόμησης Probit χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα στατιστικής υπολογιστών SPSS (έκδοση 19.0). Οι θανατηφόρες τιμές 25%, 50%, 90%, 95% και 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 και LD99, αντίστοιχα) υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% ΔΕ). Οι μετρήσεις σημαντικότητας και διαφορών μεταξύ των δειγμάτων δοκιμής αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ χ2 ή το τεστ Mann-Whitney U σε κάθε βιολογική δοκιμασία. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικά στο P< 0,05. Ο συντελεστής αντίστασης (RR) εκτιμάται στο επίπεδο LD50 χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο [12]:
RR > 1 υποδεικνύει αντίσταση και RR ≤ 1 υποδεικνύει ευαισθησία. Η τιμή του λόγου συνέργειας (SR) κάθε υποψήφιου συνεργιστή υπολογίζεται ως εξής [34, 35, 44]:
Αυτός ο παράγοντας χωρίζει τα αποτελέσματα σε τρεις κατηγορίες: μια τιμή SR 1±0,05 θεωρείται ότι δεν έχει εμφανή επίδραση, μια τιμή SR >1,05 θεωρείται ότι έχει συνεργιστική επίδραση και μια τιμή SR ενός ανοιχτόχρωμου κίτρινου υγρού ελαίου μπορεί να ληφθεί με απόσταξη με ατμό των ριζωμάτων των C. rotundus και A. galanga και του φλοιού του C. verum. Οι αποδόσεις που υπολογίστηκαν σε ξηρό βάρος ήταν 0,15%, 0,27% (w/w) και 0,54% (v/v). w) αντίστοιχα (Πίνακας 1). Η μελέτη GC-MS της χημικής σύνθεσης των ελαίων των C. rotundus, A. galanga και C. verum έδειξε την παρουσία 19, 17 και 21 ενώσεων, οι οποίες αντιπροσώπευαν το 80,22%, 86,75% και 97,24% όλων των συστατικών, αντίστοιχα (Πίνακας 2). Οι ενώσεις του ριζωματώδους ελαίου του C. lucidum αποτελούνται κυρίως από κυπερονένιο (14,04%), ακολουθούμενο από καραλένιο (9,57%), α-καψελλάνη (7,97%) και α-καψελλάνη (7,53%). Το κύριο χημικό συστατικό του ριζωματώδους ελαίου της γκαλάνγκαλ είναι το β-βισαβολένιο (18,27%), ακολουθούμενο από α-μπεργκαμοτένη (16,28%), 1,8-κινεόλη (10,17%) και πιπερονόλη (10,09%). Ενώ η κινναμαλδεΰδη (64,66%) αναγνωρίστηκε ως το κύριο συστατικό του ελαίου φλοιού του C. verum, το οξικό κινναμωμικό οξύ (6,61%), το α-κοπαένιο (5,83%) και η 3-φαινυλοπροπιοναλδεΰδη (4,09%) θεωρήθηκαν δευτερεύοντα συστατικά. Οι χημικές δομές του κυπερνίου, του β-βισαβολενίου και της κινναμαλδεΰδης είναι οι κύριες ενώσεις των C. rotundus, A. galanga και C. verum, αντίστοιχα, όπως φαίνεται στο Σχήμα 2.
Τα αποτελέσματα από τρεις ΟΟ αξιολογούν την δραστικότητα των ενήλικων κουνουπιών έναντι των κουνουπιών Aedes. Τα κουνούπια aegypti παρουσιάζονται στον Πίνακα 3. Όλα τα ΕΟ βρέθηκαν να έχουν θανατηφόρες επιδράσεις στα κουνούπια MCM-S Aedes σε διαφορετικούς τύπους και δόσεις. Aedes aegypti. Το πιο αποτελεσματικό ΕΟ είναι το C. verum, ακολουθούμενο από τα A. galanga και C. rotundus με τιμές LD50 3,30, 7,97 και 10,05 μg/mg MCM-S θηλυκά αντίστοιχα, ελαφρώς υψηλότερες από 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) και 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R στις γυναίκες. Αυτό αντιστοιχεί σε ελαφρώς υψηλότερη επίδραση του PBO σε ενήλικα στελέχη στο PMD-R από το στέλεχος MSM-S, με τιμές LD50 4,79 και 6,30 μg/mg θηλυκών, αντίστοιχα (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Μπορεί να υπολογιστεί ότι οι τιμές LD50 των C. verum, A. galanga, C. rotundus και PBO έναντι του PMD-R είναι περίπου 0,98, 0,99, 0,95 και 0,76 φορές χαμηλότερες από εκείνες έναντι του MCM-S, αντίστοιχα. Έτσι, αυτό δείχνει ότι η ευαισθησία στο PBO και το EO είναι σχετικά παρόμοια μεταξύ των δύο στελεχών Aedes. Αν και το PMD-R ήταν πιο ευαίσθητο από το MCM-S, η ευαισθησία του Aedes aegypti δεν ήταν σημαντική. Αντίθετα, τα δύο στελέχη Aedes διέφεραν σημαντικά στην ευαισθησία τους στην περμεθρίνη aegypti (Πίνακας 4). Το PMD-R επέδειξε σημαντική αντοχή στην περμεθρίνη (τιμή LD50 = 0,44 ng/mg στις γυναίκες) με υψηλότερη τιμή LD50 3,70 σε σύγκριση με το MCM-S (τιμή LD50 = 0,44 ng/mg στις γυναίκες) ng/mg στις γυναίκες (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Αν και το PMD-R είναι πολύ λιγότερο ευαίσθητο στην περμεθρίνη από το MCM-S, η ευαισθησία του στο PBO και στα έλαια C. verum, A. galanga και C. rotundus είναι ελαφρώς υψηλότερη από το MCM-S.
Όπως παρατηρήθηκε στη βιοδοκιμασία του συνδυασμού EO-περμεθρίνης σε ενήλικο πληθυσμό, τα δυαδικά μείγματα περμεθρίνης και EO (LD25) έδειξαν είτε συνέργεια (τιμή SR > 1,05) είτε καμία επίδραση (τιμή SR = 1 ± 0,05). Σύνθετες επιδράσεις ενός μείγματος EO-περμεθρίνης σε ενήλικες σε πειραματικά κουνούπια αλμπίνο. Τα στελέχη Aedes aegypti MCM-S και PMD-R παρουσιάζονται στον Πίνακα 4 και στο Σχήμα 3. Η προσθήκη ελαίου C. verum βρέθηκε να μειώνει ελαφρώς την LD50 της περμεθρίνης έναντι της MCM-S και να αυξάνει ελαφρώς την LD50 έναντι του PMD-R σε 0,44–0,42 ng/mg στις γυναίκες και από 3,70 σε 3,85 ng/mg στις γυναίκες, αντίστοιχα. Αντιθέτως, η προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga μείωσε σημαντικά την LD50 της περμεθρίνης στο MCM-S από 0,44 σε 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και σε 0,11 (U = 0). , Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg στις γυναίκες. Με βάση τις τιμές LD50 του MCM-S, οι τιμές SR του μείγματος EO-περμεθρίνης μετά την προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga ήταν 6,28 και 4,00, αντίστοιχα. Συνεπώς, η LD50 της περμεθρίνης έναντι του PMD-R μειώθηκε σημαντικά από 3,70 σε 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και σε 0,003 με την προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga (U = 0). , Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg θηλυκού. Η τιμή SR της περμεθρίνης σε συνδυασμό με το C. rotundus έναντι του PMD-R ήταν 8,81, ενώ η τιμή SR του μείγματος γκαλανγκάλης-περμεθρίνης ήταν 1233,33. Σε σχέση με το MCM-S, η τιμή LD50 του θετικού μάρτυρα PBO μειώθηκε από 0,44 σε 0,26 ng/mg (θηλυκά) και από 3,70 ng/mg (θηλυκά) σε 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Οι τιμές SR του μείγματος PBO-περμεθρίνης για τα στελέχη MCM-S και PMD-R ήταν 1,69 και 5,69, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα έλαια C. rotundus και A. galanga και το PBO ενισχύουν την τοξικότητα της περμεθρίνης σε μεγαλύτερο βαθμό από το έλαιο C. verum για τα στελέχη MCM-S και PMD-R.
Δράση ενηλίκων (LD50) των EO, PBO, περμεθρίνης (PE) και των συνδυασμών τους έναντι στελεχών κουνουπιών Aedes ευαίσθητων στα πυρεθροειδή (MCM-S) και ανθεκτικών (PMD-R). Aedes aegypti
[45]. Τα συνθετικά πυρεθροειδή χρησιμοποιούνται παγκοσμίως για τον έλεγχο σχεδόν όλων των αρθροπόδων γεωργικής και ιατρικής σημασίας. Ωστόσο, λόγω των επιβλαβών συνεπειών της χρήσης συνθετικών εντομοκτόνων, ιδίως όσον αφορά την ανάπτυξη και την ευρεία ανθεκτικότητα των κουνουπιών, καθώς και τις επιπτώσεις στη μακροπρόθεσμη υγεία και το περιβάλλον, υπάρχει πλέον επείγουσα ανάγκη να μειωθεί η χρήση των παραδοσιακών συνθετικών εντομοκτόνων και να αναπτυχθούν εναλλακτικές λύσεις [35, 46, 47]. Εκτός από την προστασία του περιβάλλοντος και της ανθρώπινης υγείας, τα πλεονεκτήματα των βοτανικών εντομοκτόνων περιλαμβάνουν υψηλή επιλεκτικότητα, παγκόσμια διαθεσιμότητα και ευκολία παραγωγής και χρήσης, καθιστώντας τα πιο ελκυστικά για τον έλεγχο των κουνουπιών [32,48, 49]. Αυτή η μελέτη, εκτός από τη διαλεύκανση των χημικών χαρακτηριστικών αποτελεσματικών αιθέριων ελαίων μέσω ανάλυσης GC-MS, αξιολόγησε επίσης την ισχύ των ενήλικων αιθέριων ελαίων και την ικανότητά τους να ενισχύουν την τοξικότητα της συνθετικής περμεθρίνης aegypti σε στελέχη ευαίσθητα στα πυρεθροειδή (MCM-S) και ανθεκτικά στελέχη (PMD-R).
Ο χαρακτηρισμός με GC-MS έδειξε ότι το κυπερνίτιο (14,04%), το β-βισαβολένιο (18,27%) και η κινναμαλδεΰδη (64,66%) ήταν τα κύρια συστατικά των ελαίων C. rotundus, A. galanga και C. verum, αντίστοιχα. Αυτές οι χημικές ουσίες έχουν επιδείξει ποικίλες βιολογικές δραστηριότητες. Οι Ahn et al. [50] ανέφεραν ότι το 6-ακετοξυκυπερένιο, που απομονώθηκε από το ρίζωμα του C. rotundus, δρα ως αντικαρκινική ένωση και μπορεί να προκαλέσει απόπτωση εξαρτώμενη από κασπάση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Το β-βισαβολένιο, που εξάγεται από το αιθέριο έλαιο του μύρου, παρουσιάζει ειδική κυτταροτοξικότητα έναντι των καρκινικών κυττάρων του μαστού σε ανθρώπους και ποντίκια τόσο in vitro όσο και in vivo [51]. Η κινναμαλδεΰδη, που λαμβάνεται από φυσικά εκχυλίσματα ή συντίθεται στο εργαστήριο, έχει αναφερθεί ότι έχει εντομοκτόνες, αντιβακτηριακές, αντιμυκητιακές, αντιφλεγμονώδεις, ανοσοτροποποιητικές, αντικαρκινικές και αντιαγγειογενετικές δράσεις [52].
Τα αποτελέσματα της δοσοεξαρτώμενης βιοδοκιμασίας δραστικότητας σε ενήλικες έδειξαν καλό δυναμικό των εξεταζόμενων EOs και έδειξαν ότι τα στελέχη κουνουπιών Aedes MCM-S και PMD-R είχαν παρόμοια ευαισθησία με το EO και το PBO. Aedes aegypti. Μια σύγκριση της αποτελεσματικότητας του EO και της περμεθρίνης έδειξε ότι το δεύτερο έχει ισχυρότερη αλλεργιοκτόνο δράση: Οι τιμές LD50 είναι 0,44 και 3,70 ng/mg στα θηλυκά για τα στελέχη MCM-S και PMD-R, αντίστοιχα. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζονται από πολλές μελέτες που δείχνουν ότι τα φυσικά φυτοφάρμακα, ειδικά τα προϊόντα φυτικής προέλευσης, είναι γενικά λιγότερο αποτελεσματικά από τις συνθετικές ουσίες [31, 34, 35, 53, 54]. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι το πρώτο είναι ένας σύνθετος συνδυασμός δραστικών ή αδρανών συστατικών, ενώ το δεύτερο είναι μια καθαρισμένη μεμονωμένη δραστική ένωση. Ωστόσο, η ποικιλομορφία και η πολυπλοκότητα των φυσικών δραστικών συστατικών με διαφορετικούς μηχανισμούς δράσης μπορεί να ενισχύσει τη βιολογική δραστηριότητα ή να εμποδίσει την ανάπτυξη αντοχής σε πληθυσμούς ξενιστών [55, 56, 57]. Πολλοί ερευνητές έχουν αναφέρει την αντικουνουπική δράση των C. verum, A. galanga και C. rotundus και των συστατικών τους όπως η β-βισαβολένη, η κινναμαλδεΰδη και η 1,8-κινεόλη [22, 36, 58, 59, 60,61, 62,63,64]. Ωστόσο, μια ανασκόπηση της βιβλιογραφίας αποκάλυψε ότι δεν έχουν υπάρξει προηγούμενες αναφορές για τη συνεργιστική της δράση με την περμεθρίνη ή άλλα συνθετικά εντομοκτόνα κατά των κουνουπιών Aedes. Aedes aegypti.
Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην ευαισθησία στην περμεθρίνη μεταξύ των δύο στελεχών Aedes. Aedes aegypti. Το MCM-S είναι ευαίσθητο στην περμεθρίνη, ενώ το PMD-R είναι πολύ λιγότερο ευαίσθητο σε αυτήν, με ποσοστό αντοχής 8,41. Σε σύγκριση με την ευαισθησία του MCM-S, το PMD-R είναι λιγότερο ευαίσθητο στην περμεθρίνη αλλά πιο ευαίσθητο στην αιθανόλη, παρέχοντας τη βάση για περαιτέρω μελέτες που στοχεύουν στην αύξηση της αποτελεσματικότητας της περμεθρίνης συνδυάζοντάς την με αιθανόλη. Μια συνεργιστική βιοδοκιμασία βασισμένη σε συνδυασμό για επιδράσεις σε ενήλικες έδειξε ότι δυαδικά μείγματα αιθανόλης και περμεθρίνης μείωσαν ή αύξησαν τη θνησιμότητα των ενήλικων στελεχών Aedes. Aedes aegypti. Η προσθήκη ελαίου C. verum μείωσε ελαφρώς την LD50 της περμεθρίνης έναντι της MCM-S, αλλά αύξησε ελαφρώς την LD50 έναντι του PMD-R με τιμές SR 1,05 και 0,96, αντίστοιχα. Αυτό υποδεικνύει ότι το έλαιο C. verum δεν έχει συνεργιστική ή ανταγωνιστική δράση στην περμεθρίνη όταν δοκιμάστηκε σε MCM-S και PMD-R. Αντίθετα, τα έλαια C. rotundus και A. galanga έδειξαν σημαντική συνεργιστική δράση μειώνοντας σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης σε MCM-S ή PMD-R. Όταν η περμεθρίνη συνδυάστηκε με EO των C. rotundus και A. galanga, οι τιμές SR του μείγματος EO-περμεθρίνης για την MCM-S ήταν 6,28 και 4,00, αντίστοιχα. Επιπλέον, όταν η περμεθρίνη αξιολογήθηκε έναντι του PMD-R σε συνδυασμό με C. rotundus (SR = 8,81) ή A. galanga (SR = 1233,33), οι τιμές SR αυξήθηκαν σημαντικά. Αξίζει να σημειωθεί ότι τόσο το C. rotundus όσο και το A. galanga αύξησαν σημαντικά την τοξικότητα της περμεθρίνης έναντι του PMD-R Ae. aegypti. Ομοίως, διαπιστώθηκε ότι το PBO αυξάνει την τοξικότητα της περμεθρίνης με τιμές SR 1,69 και 5,69 για τα στελέχη MCM-S και PMD-R, αντίστοιχα. Δεδομένου ότι τα C. rotundus και A. galanga είχαν τις υψηλότερες τιμές SR, θεωρήθηκαν ως οι καλύτεροι συνεργιστές στην ενίσχυση της τοξικότητας της περμεθρίνης στα στελέχη MCM-S και PMD-R, αντίστοιχα.
Αρκετές προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει τη συνεργιστική επίδραση συνδυασμών συνθετικών εντομοκτόνων και φυτικών εκχυλισμάτων έναντι διαφόρων ειδών κουνουπιών. Μια προνυμφοκτόνος βιοδοκιμασία κατά του Anopheles Stephensi που μελετήθηκε από τους Kalayanasundaram και Das [65] έδειξε ότι το φενθείο, ένα οργανοφωσφορικό ευρέος φάσματος, συσχετίστηκε με τα Cleodendron inerme, Pedalium murax και Parthenium hysterophorus. Παρατηρήθηκε σημαντική συνέργεια μεταξύ των εκχυλισμάτων με συνεργιστική επίδραση (SF) 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 και 2,23, αντίστοιχα. Σε μια προνυμφοκτόνο διαλογή 15 ειδών μαγκρόβιων, το εκχύλισμα πετρελαϊκού αιθέρα από ρίζες μαγκρόβιων βρέθηκε να είναι πιο αποτελεσματικό έναντι του Culex quinquefasciatus με τιμή LC50 25,7 mg/L [66]. Η συνεργιστική δράση αυτού του εκχυλίσματος και του βοτανικού εντομοκτόνου πυρέθρου αναφέρθηκε επίσης ότι μειώνει την LC50 του πυρέθρου έναντι των προνυμφών C. quinquefasciatus από 0,132 mg/L σε 0,107 mg/L, επιπλέον, σε αυτή τη μελέτη χρησιμοποιήθηκε υπολογισμός SF 1,23. 34,35,44]. Αξιολογήθηκε η συνδυασμένη αποτελεσματικότητα του εκχυλίσματος ρίζας κιτρίνης Solanum και αρκετών συνθετικών εντομοκτόνων (π.χ. φενθείο, κυπερμεθρίνη (ένα συνθετικό πυρεθροειδές) και timethphos (ένα οργανοφωσφορικό προνυμφοκτόνο)) έναντι των κουνουπιών Anopheles. Stephensi [54] και C. quinquefasciatus [34]. Η συνδυασμένη χρήση κυπερμεθρίνης και εκχυλίσματος πετρελαϊκού αιθέρα κίτρινου καρπού έδειξε συνεργιστική δράση στην κυπερμεθρίνη σε όλες τις αναλογίες. Η πιο αποτελεσματική αναλογία ήταν ο δυαδικός συνδυασμός 1:1 με τιμές LC50 και SF 0,0054 ppm και 6,83, αντίστοιχα, σε σχέση με τον An. Stephen West [54]. Ενώ ένα δυαδικό μείγμα 1:1 S. xanthocarpum και temephos ήταν ανταγωνιστικό (SF = 0,6406), ο συνδυασμός S. xanthocarpum-fenthion (1:1) εμφάνισε συνεργιστική δράση έναντι του C. quinquefasciatus με SF 1,3125 [34]]. Οι Tong και Blomquist [35] μελέτησαν τις επιδράσεις του φυτικού αιθυλενοξειδίου στην τοξικότητα του καρβαρυλίου (ένα καρβαμιδικό ευρέος φάσματος) και της περμεθρίνης στα κουνούπια Aedes. Aedes aegypti. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το αιθυλενοξείδιο από άγαρ, μαύρο πιπέρι, άρκευθο, ελίχρυσο, σανταλόξυλο και σουσάμι αύξησε την τοξικότητα του καρβαρυλίου στα κουνούπια Aedes. Οι τιμές SR των προνυμφών aegypti ποικίλλουν από 1,0 έως 7,0. Αντίθετα, κανένα από τα EOs δεν ήταν τοξικό για τα ενήλικα κουνούπια Aedes. Σε αυτό το στάδιο, δεν έχουν αναφερθεί συνεργιστικές επιδράσεις για τον συνδυασμό Aedes aegypti και EO-καρβαρυλίου. Το PBO χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για την ενίσχυση της τοξικότητας του καρβαρυλίου έναντι των κουνουπιών Aedes. Οι τιμές SR των προνυμφών και των ενηλίκων Aedes aegypti είναι 4,9-9,5 και 2,3, αντίστοιχα. Μόνο δυαδικά μείγματα περμεθρίνης και EO ή PBO δοκιμάστηκαν για προνυμφοκτόνο δράση. Το μείγμα EO-περμεθρίνης είχε ανταγωνιστική δράση, ενώ το μείγμα PBO-περμεθρίνης είχε συνεργιστική δράση έναντι των κουνουπιών Aedes. Ωστόσο, πειράματα δόσης-απόκρισης και αξιολόγηση SR για μείγματα PBO-περμεθρίνης δεν έχουν ακόμη πραγματοποιηθεί. Παρόλο που έχουν επιτευχθεί λίγα αποτελέσματα σχετικά με τις συνεργιστικές επιδράσεις των φυτοσυνθετικών συνδυασμών έναντι των φορέων κουνουπιών, αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν τα υπάρχοντα αποτελέσματα, τα οποία ανοίγουν την προοπτική προσθήκης συνεργιστικών όχι μόνο για τη μείωση της εφαρμοζόμενης δόσης, αλλά και για την αύξηση της εξοντωτικής δράσης. Αποτελεσματικότητα των εντόμων. Επιπλέον, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης κατέδειξαν για πρώτη φορά ότι τα έλαια C. rotundus και A. galanga ασκούν συνεργιστικά σημαντικά υψηλότερη αποτελεσματικότητα έναντι στελεχών κουνουπιών Aedes ευαίσθητων στα πυρεθροειδή και ανθεκτικών στα πυρεθροειδή σε σύγκριση με το PBO όταν συνδυάζεται με τοξικότητα περμεθρίνης. Aedes aegypti. Ωστόσο, απροσδόκητα αποτελέσματα από τη συνεργιστική ανάλυση έδειξαν ότι το έλαιο C. verum είχε τη μεγαλύτερη αντι-ενήλικη δράση έναντι και των δύο στελεχών Aedes. Παραδόξως, η τοξική επίδραση της περμεθρίνης στο Aedes aegypti δεν ήταν ικανοποιητική. Οι διακυμάνσεις στις τοξικές επιδράσεις και στις συνεργιστικές επιδράσεις μπορεί να οφείλονται εν μέρει στην έκθεση σε διαφορετικούς τύπους και επίπεδα βιοδραστικών συστατικών σε αυτά τα έλαια.
Παρά τις προσπάθειες για την κατανόηση του τρόπου βελτίωσης της αποτελεσματικότητας, οι συνεργιστικοί μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς. Πιθανοί λόγοι για τη διαφορετική αποτελεσματικότητα και το συνεργιστικό δυναμικό μπορεί να περιλαμβάνουν διαφορές στη χημική σύνθεση των προϊόντων που δοκιμάστηκαν και διαφορές στην ευαισθησία στα κουνούπια που σχετίζονται με την κατάσταση και την ανάπτυξη αντοχής. Υπάρχουν διαφορές μεταξύ των κύριων και δευτερευόντων συστατικών του οξειδίου του αιθυλενίου που δοκιμάστηκαν σε αυτή τη μελέτη και ορισμένες από αυτές τις ενώσεις έχουν αποδειχθεί ότι έχουν απωθητικές και τοξικές επιδράσεις έναντι μιας ποικιλίας παρασίτων και φορέων ασθενειών [61,62,64,67,68]. Ωστόσο, οι κύριες ενώσεις που χαρακτηρίζονται στα έλαια C. rotundus, A. galanga και C. verum, όπως το κυπερνικό, το β-βισαβολένιο και η κινναμαλδεΰδη, δεν δοκιμάστηκαν σε αυτή την εργασία για την αντι-ενήλικη και συνεργιστική τους δράση έναντι του Ae, αντίστοιχα. Aedes aegypti. Επομένως, απαιτούνται μελλοντικές μελέτες για την απομόνωση των δραστικών συστατικών που υπάρχουν σε κάθε αιθέριο έλαιο και την αποσαφήνιση της εντομοκτόνου αποτελεσματικότητάς τους και των συνεργιστικών αλληλεπιδράσεών τους έναντι αυτού του φορέα κουνουπιών. Γενικά, η εντομοκτόνος δράση εξαρτάται από τη δράση και την αντίδραση μεταξύ δηλητηρίων και ιστών εντόμων, η οποία μπορεί να απλοποιηθεί και να χωριστεί σε τρία στάδια: διείσδυση στο δέρμα του σώματος του εντόμου και στις μεμβράνες των οργάνων-στόχων, ενεργοποίηση (= αλληλεπίδραση με τον στόχο) και αποτοξίνωση από τοξικές ουσίες [57, 69]. Επομένως, η συνέργεια των εντομοκτόνων που οδηγεί σε αυξημένη αποτελεσματικότητα των συνδυασμών τοξικών ουσιών απαιτεί τουλάχιστον μία από αυτές τις κατηγορίες, όπως αυξημένη διείσδυση, μεγαλύτερη ενεργοποίηση συσσωρευμένων ενώσεων ή λιγότερο μειωμένη αποτοξίνωση του δραστικού συστατικού του φυτοφαρμάκου. Για παράδειγμα, η ενεργειακή ανοχή καθυστερεί τη διείσδυση της επιδερμίδας μέσω μιας παχιάς επιδερμίδας και τη βιοχημική αντοχή, όπως ο ενισχυμένος μεταβολισμός των εντομοκτόνων που παρατηρείται σε ορισμένα ανθεκτικά στελέχη εντόμων [70, 71]. Η σημαντική αποτελεσματικότητα των αιθεροβασικών ενώσεων στην αύξηση της τοξικότητας της περμεθρίνης, ειδικά έναντι του PMD-R, μπορεί να υποδηλώνει μια λύση στο πρόβλημα της αντοχής στα εντομοκτόνα μέσω της αλληλεπίδρασης με μηχανισμούς αντοχής [57, 69, 70, 71]. Οι Tong και Blomquist [35] υποστήριξαν τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης καταδεικνύοντας μια συνεργιστική αλληλεπίδραση μεταξύ των αιθεροβασικών εντόμων και των συνθετικών φυτοφαρμάκων. aegypti, υπάρχουν ενδείξεις ανασταλτικής δράσης έναντι ενζύμων αποτοξίνωσης, συμπεριλαμβανομένων των μονοοξυγενασών και των καρβοξυλεστερασών του κυτοχρώματος P450, τα οποία συνδέονται στενά με την ανάπτυξη αντοχής στα παραδοσιακά φυτοφάρμακα. Το PBO δεν λέγεται μόνο ότι είναι ένας μεταβολικός αναστολέας της μονοοξυγενάσης του κυτοχρώματος P450, αλλά βελτιώνει επίσης τη διείσδυση των εντομοκτόνων, όπως αποδεικνύεται από τη χρήση του ως θετικού ελέγχου σε συνεργιστικές μελέτες [35, 72]. Είναι ενδιαφέρον ότι η 1,8-κινεόλη, ένα από τα σημαντικά συστατικά που βρίσκονται στο έλαιο γκαλάνγκαλ, είναι γνωστή για τις τοξικές της επιδράσεις σε είδη εντόμων [22, 63, 73] και έχει αναφερθεί ότι έχει συνεργιστικές επιδράσεις σε διάφορους τομείς της έρευνας βιολογικής δραστηριότητας [74]. . ,75,76,77]. Επιπλέον, η 1,8-κινεόλη σε συνδυασμό με διάφορα φάρμακα, όπως η κουρκουμίνη [78], η 5-φθοροουρακίλη [79], το μεφεναμικό οξύ [80] και η ζιδοβουδίνη [81], έχει επίσης μια επίδραση που προάγει τη διείσδυση in vitro. Έτσι, ο πιθανός ρόλος της 1,8-κινεόλης στη συνεργιστική εντομοκτόνο δράση δεν είναι μόνο ως δραστικό συστατικό αλλά και ως ενισχυτής διείσδυσης. Λόγω της μεγαλύτερης συνεργίας με την περμεθρίνη, ειδικά έναντι του PMD-R, οι συνεργιστικές επιδράσεις του ελαίου γκαλάνγκαλ και του ελαίου τριχοσανθών που παρατηρήθηκαν σε αυτή τη μελέτη μπορεί να προκύψουν από αλληλεπιδράσεις με μηχανισμούς αντοχής, δηλαδή αυξημένη διαπερατότητα στο χλώριο. Τα πυρεθροειδή αυξάνουν την ενεργοποίηση των συσσωρευμένων ενώσεων και αναστέλλουν τα ένζυμα αποτοξίνωσης όπως οι μονοοξυγενάσες και οι καρβοξυλεστεράσες του κυτοχρώματος P450. Ωστόσο, αυτές οι πτυχές απαιτούν περαιτέρω μελέτη για να διευκρινιστεί ο συγκεκριμένος ρόλος του EO και των απομονωμένων ενώσεών του (μόνων ή σε συνδυασμό) σε συνεργιστικούς μηχανισμούς.
Το 1977, αναφέρθηκαν αυξανόμενα επίπεδα αντοχής στην περμεθρίνη σε σημαντικούς πληθυσμούς φορέων στην Ταϊλάνδη και, κατά τις επόμενες δεκαετίες, η χρήση της περμεθρίνης αντικαταστάθηκε σε μεγάλο βαθμό από άλλες πυρεθρίνες, ειδικά από εκείνες που αντικαταστάθηκαν από δελταμεθρίνη [82]. Ωστόσο, η αντοχή των φορέων στη δελταμεθρίνη και σε άλλες κατηγορίες εντομοκτόνων είναι εξαιρετικά συχνή σε όλη τη χώρα λόγω της υπερβολικής και επίμονης χρήσης [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Για την καταπολέμηση αυτού του προβλήματος, συνιστάται η εναλλαγή ή η επαναχρησιμοποίηση απορριφθέντων φυτοφαρμάκων που ήταν προηγουμένως αποτελεσματικά και λιγότερο τοξικά για τα θηλαστικά, όπως η περμεθρίνη. Επί του παρόντος, αν και η χρήση της περμεθρίνης έχει μειωθεί στα πρόσφατα εθνικά κυβερνητικά προγράμματα ελέγχου κουνουπιών, η αντοχή στην περμεθρίνη εξακολουθεί να εντοπίζεται σε πληθυσμούς κουνουπιών. Αυτό μπορεί να οφείλεται στην έκθεση των κουνουπιών σε εμπορικά οικιακά προϊόντα ελέγχου παρασίτων, τα οποία αποτελούνται κυρίως από περμεθρίνη και άλλα πυρεθροειδή [14, 17]. Έτσι, η επιτυχής επαναχρησιμοποίηση της περμεθρίνης απαιτεί την ανάπτυξη και εφαρμογή στρατηγικών για τη μείωση της αντοχής των φορέων. Παρόλο που κανένα από τα αιθέρια έλαια που δοκιμάστηκαν μεμονωμένα σε αυτή τη μελέτη δεν ήταν τόσο αποτελεσματικό όσο η περμεθρίνη, η συνδυασμένη δράση της με την περμεθρίνη είχε ως αποτέλεσμα εντυπωσιακά συνεργιστικά αποτελέσματα. Αυτή είναι μια πολλά υποσχόμενη ένδειξη ότι η αλληλεπίδραση της αιθέριας ελαιοτριβής με τους μηχανισμούς αντοχής έχει ως αποτέλεσμα ο συνδυασμός της περμεθρίνης με την αιθέρια ελαιοτριβή να είναι πιο αποτελεσματικός από το εντομοκτόνο ή την αιθέρια ελαιοτριβή μόνο του, ιδιαίτερα έναντι του PMD-R Ae. Aedes aegypti. Τα οφέλη των συνεργιστικών μειγμάτων στην αύξηση της αποτελεσματικότητας, παρά τη χρήση χαμηλότερων δόσεων για τον έλεγχο των φορέων, μπορεί να οδηγήσουν σε βελτιωμένη διαχείριση της αντοχής και μειωμένο κόστος [33, 87]. Από αυτά τα αποτελέσματα, είναι ευχάριστο να σημειωθεί ότι τα αιθέρια έλαια A. galanga και C. rotundus ήταν σημαντικά πιο αποτελεσματικά από το PBO στη συνεργιστική τοξικότητα της περμεθρίνης τόσο στα στελέχη MCM-S όσο και στα στελέχη PMD-R και αποτελούν μια πιθανή εναλλακτική λύση στα παραδοσιακά εργογόνα βοηθήματα.
Τα επιλεγμένα εντομοκτόνα είχαν σημαντικά συνεργιστικά αποτελέσματα στην ενίσχυση της τοξικότητας σε ενήλικες έναντι του PMD-R. Το Ae. aegypti, ιδιαίτερα το έλαιο γκαλάνγκαλ, έχει τιμή SR έως 1233,33, υποδεικνύοντας ότι το εντομοκτόνο έχει ευρεία υπόσχεση ως συνεργιστικό στην ενίσχυση της αποτελεσματικότητας της περμεθρίνης. Αυτό μπορεί να διεγείρει τη χρήση ενός νέου δραστικού φυσικού προϊόντος, το οποίο μαζί θα μπορούσε να αυξήσει τη χρήση εξαιρετικά αποτελεσματικών προϊόντων ελέγχου κουνουπιών. Αποκαλύπτει επίσης τη δυνατότητα του οξειδίου του αιθυλενίου ως εναλλακτικού συνεργιστικού για την αποτελεσματική βελτίωση παλαιότερων ή παραδοσιακών εντομοκτόνων για την αντιμετώπιση υφιστάμενων προβλημάτων αντοχής στους πληθυσμούς κουνουπιών. Η χρήση άμεσα διαθέσιμων φυτών σε προγράμματα ελέγχου κουνουπιών όχι μόνο μειώνει την εξάρτηση από εισαγόμενα και ακριβά υλικά, αλλά και διεγείρει τις τοπικές προσπάθειες για την ενίσχυση των συστημάτων δημόσιας υγείας.
Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ξεκάθαρα τη σημαντική συνεργιστική δράση που παράγεται από τον συνδυασμό οξειδίου του αιθυλενίου και περμεθρίνης. Τα αποτελέσματα υπογραμμίζουν τις δυνατότητες του οξειδίου του αιθυλενίου ως φυτικού συνεργιστικού στην καταπολέμηση των κουνουπιών, αυξάνοντας την αποτελεσματικότητα της περμεθρίνης κατά των κουνουπιών, ειδικά σε ανθεκτικούς πληθυσμούς. Οι μελλοντικές εξελίξεις και η έρευνα θα απαιτήσουν συνεργιστική βιοανάλυση των ελαίων γαλαγγάλης και αλπίνιας και των απομονωμένων ενώσεών τους, συνδυασμούς εντομοκτόνων φυσικής ή συνθετικής προέλευσης έναντι πολλαπλών ειδών και σταδίων κουνουπιών, καθώς και δοκιμές τοξικότητας έναντι μη στοχευόμενων οργανισμών. Πρακτική χρήση του οξειδίου του αιθυλενίου ως βιώσιμου εναλλακτικού συνεργιστικού.
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Παγκόσμια στρατηγική για την πρόληψη και τον έλεγχο του δάγκειου πυρετού 2012–2020. Γενεύη: Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Ιός Ζίκα: ιστορία, εμφάνιση, βιολογία και προοπτικές ελέγχου. Έρευνα κατά των ιών. 2016; 130:69–80.
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Ενημερωτικό δελτίο για τον δάγκειο πυρετό. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Ημερομηνία πρόσβασης: 20 Ιανουαρίου 2017
Υπουργείο Δημόσιας Υγείας. Τρέχουσα κατάσταση των κρουσμάτων δάγκειου πυρετού και αιμορραγικού δάγκειου πυρετού στην Ταϊλάνδη. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Ημερομηνία πρόσβασης: 6 Ιανουαρίου 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 χρόνια πρόληψης του δάγκειου πυρετού και ελέγχου φορέων στη Σιγκαπούρη. Αιφνίδια λοιμώδης νόσος. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Προσδιορισμός προκλήσεων και πρόταση λύσεων για τον έλεγχο των ιικών φορέων Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων. Δάγκειος πυρετός, εντομολογία και οικολογία. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Ημερομηνία πρόσβασης: 6 Ιανουαρίου 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Σύγκριση της προνυμφοκτόνου δράσης των φύλλων, του φλοιού, των στελεχών και των ριζών του Jatropa curcas (Euphorbiaceae) έναντι του φορέα της ελονοσίας Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Χαρακτηριστικά ενδιαιτημάτων των προνυμφών Anopheles σε περιοχές ελονοσίας του προγράμματος εξάλειψης της ελονοσίας στο νοτιοανατολικό Ιράν. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Ανασκόπηση των προσεγγίσεων για τον έλεγχο των φορέων, την πρόληψη και τον έλεγχο των κρουσμάτων του ιού του Δυτικού Νείλου και τις προκλήσεις που αντιμετωπίζει η Ευρώπη. Παράσιτα φορέας. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Επιλογή και μοριακοί μηχανισμοί αντοχής στην κυπερμεθρίνη σε κόκκινες κάμπιες (Amsacta albistriga Walker). Βιοχημική φυσιολογία των παρασίτων. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Εργαστηριακή μελέτη της αντοχής στην περμεθρίνη και της διασταυρούμενης αντοχής του Culex quinquefasciatus σε άλλα εντομοκτόνα. Palastor Research Center. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Χημεία Φυτοφαρμάκων: Ανθρώπινη Ευημερία και Περιβάλλον, Τόμος 3: Μηχανισμός δράσης, μεταβολισμός και τοξικολογία. Νέα Υόρκη: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Μια ανασκόπηση της αντοχής στα εντομοκτόνα και της συμπεριφορικής αποφυγής των φορέων ανθρώπινων ασθενειών στην Ταϊλάνδη. Φορέας παρασίτων. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Τρέχοντα πρότυπα αντοχής στα εντομοκτόνα μεταξύ των κουνουπιών-φορέων στην Ταϊλάνδη. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Κατάσταση της ελονοσίας στην Ταϊλάνδη. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Χρονική συχνότητα μεταλλάξεων αντοχής στην καταστολή των κουνουπιών Aedes aegypti στο Τσιάνγκ Μάι της Ταϊλάνδης και η επίδραση των μεταλλάξεων στην αποτελεσματικότητα των ψεκασμών θερμικής ομίχλης που περιέχουν πυρεθροειδή. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Αντοχή σε εντομοκτόνα στους κύριους φορείς δάγγειου πυρετού Aedes albopictus και Aedes aegypti. Βιοχημική φυσιολογία παρασίτων. 2012; 104:126–31.
Ώρα δημοσίευσης: 08 Ιουλίου 2024