Σε ένα προηγούμενο έργο που δοκιμάζει τοπικές μονάδες επεξεργασίας τροφίμων για κουνούπια στην Ταϊλάνδη, τα αιθέρια έλαια (EOs) Cyperus rotundus, galangal και κανέλας βρέθηκαν να έχουν καλή αντικουνουπική δράση κατά του Aedes aegypti. Σε μια προσπάθεια μείωσης της χρήσης των παραδοσιακώνεντομοκτόνακαι να βελτιώσει τον έλεγχο των ανθεκτικών πληθυσμών κουνουπιών, αυτή η μελέτη στόχευε στον εντοπισμό της πιθανής συνεργίας μεταξύ των ενηλικιοκτόνων επιδράσεων του οξειδίου του αιθυλενίου και της τοξικότητας της περμεθρίνης στα κουνούπια Aedes. aegypti, συμπεριλαμβανομένων ανθεκτικών στα πυρεθροειδή και ευαίσθητων στελεχών.
Για την αξιολόγηση της χημικής σύνθεσης και της θανάτωσης της EO που εξάγεται από ριζώματα C. rotundus και A. galanga και φλοιό C. verum έναντι του ευαίσθητου στελέχους Muang Chiang Mai (MCM-S) και του ανθεκτικού στελέχους Pang Mai Dang (PMD-R ). ) Ενήλικος ενεργός Αε. Aedes aegypti. Μια βιοδοκιμασία ενηλίκων του μίγματος ΕΟ-περμεθρίνης πραγματοποιήθηκε επίσης σε αυτά τα κουνούπια Aedes για να κατανοηθεί η συνεργιστική του δράση. στελέχη aegypti.
Ο χημικός χαρακτηρισμός με τη χρήση αναλυτικής μεθόδου GC-MS έδειξε ότι 48 ενώσεις ταυτοποιήθηκαν από τα EO των C. rotundus, A. galanga και C. verum, που αντιπροσωπεύουν το 80,22%, το 86,75% και το 97,24% των συνολικών συστατικών, αντίστοιχα. Το κυπερένιο (14,04%), το β-δισαβολένιο (18,27%) και η κινναμαλδεΰδη (64,66%) είναι τα κύρια συστατικά του ελαίου κυπερού, του ελαίου γαλαγκάλη και του βαλσαμικού ελαίου, αντίστοιχα. Σε βιολογικούς προσδιορισμούς θανάτωσης ενηλίκων, τα C. rotundus, A. galanga και C. verum EVs ήταν αποτελεσματικά στη θανάτωση του Ae. Οι τιμές αιγύπτου, MCM-S και PMD-R LD50 ήταν 10,05 και 9,57 μg/mg για γυναίκες, 7,97 και 7,94 μg/mg για γυναίκες και 3,30 και 3,22 μg/mg για γυναίκες, αντίστοιχα. Αποτελεσματικότητα των MCM-S και PMD-R Ae στη θανάτωση ενηλίκων. aegypti σε αυτά τα EO ήταν κοντά στο πιπερονυλοβουτοξείδιο (τιμές PBO, LD50 = 6,30 και 4,79 μg/mg θηλυκού, αντίστοιχα), αλλά όχι τόσο έντονες όσο η περμεθρίνη (τιμές LD50 = 0,44 και 3,70 ng/mg θηλυκού αντίστοιχα). Ωστόσο, συνδυαστικές βιοδοκιμασίες βρήκαν συνέργεια μεταξύ EO και permethrin. Σημαντική συνέργεια με την περμεθρίνη έναντι δύο στελεχών κουνουπιών Aedes. Το Aedes aegypti σημειώθηκε στο ΕΜ του C. rotundus και του A. galanga. Η προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga μείωσε σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης στο MCM-S από 0,44 σε 0,07 ng/mg και 0,11 ng/mg στις γυναίκες, αντίστοιχα, με τιμές αναλογίας συνέργειας (SR) 6,28 και 4,00 αντίστοιχα. Επιπλέον, τα C. rotundus και A. galanga EOs μείωσαν επίσης σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης στο PMD-R από 3,70 σε 0,42 ng/mg και 0,003 ng/mg στις γυναίκες, αντίστοιχα, με τιμές SR 8,81 και 1233,33, αντίστοιχα. .
Συνεργική επίδραση ενός συνδυασμού ΕΟ-περμεθρίνης για την ενίσχυση της τοξικότητας των ενηλίκων έναντι δύο στελεχών κουνουπιών Aedes. Το Aedes aegypti επιδεικνύει έναν πολλά υποσχόμενο ρόλο για το οξείδιο του αιθυλενίου ως συνεργιστικό για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας κατά των κουνουπιών, ειδικά όπου οι παραδοσιακές ενώσεις είναι αναποτελεσματικές ή ακατάλληλες.
Το κουνούπι Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) είναι ο κύριος φορέας του δάγγειου πυρετού και άλλων μολυσματικών ιογενών ασθενειών όπως ο κίτρινος πυρετός, ο chikungunya και ο ιός Zika, που αποτελούν τεράστια και επίμονη απειλή για τον άνθρωπο[1, 2]. . Ο ιός του δάγκειου πυρετού είναι ο πιο σοβαρός παθογόνος αιμορραγικός πυρετός που προσβάλλει τον άνθρωπο, με εκτιμώμενα 5-100 εκατομμύρια κρούσματα να εμφανίζονται ετησίως και περισσότερους από 2,5 δισεκατομμύρια ανθρώπους παγκοσμίως σε κίνδυνο [3]. Τα κρούσματα αυτής της μολυσματικής νόσου επιβαρύνουν τεράστιους τους πληθυσμούς, τα συστήματα υγείας και τις οικονομίες των περισσότερων τροπικών χωρών [1]. Σύμφωνα με το Υπουργείο Υγείας της Ταϊλάνδης, το 2015 καταγράφηκαν 142.925 κρούσματα δάγγειου πυρετού και 141 θάνατοι σε εθνικό επίπεδο, υπερτριπλάσιοι από τον αριθμό των κρουσμάτων και των θανάτων το 2014 [4]. Παρά τα ιστορικά στοιχεία, ο δάγγειος πυρετός έχει εξαλειφθεί ή μειωθεί σημαντικά από το κουνούπι Aedes. Μετά τον έλεγχο του Aedes aegypti [5], τα ποσοστά μόλυνσης αυξήθηκαν δραματικά και η ασθένεια εξαπλώθηκε σε όλο τον κόσμο, εν μέρει λόγω δεκαετιών υπερθέρμανσης του πλανήτη. Εξάλειψη και έλεγχος της Αε. Το Aedes aegypti είναι σχετικά δύσκολο γιατί είναι ένας οικιακός φορέας κουνουπιών που ζευγαρώνει, τρέφεται, ξεκουράζεται και γεννά αυγά μέσα και γύρω από την ανθρώπινη κατοίκηση κατά τη διάρκεια της ημέρας. Επιπλέον, αυτό το κουνούπι έχει την ικανότητα να προσαρμόζεται σε περιβαλλοντικές αλλαγές ή διαταραχές που προκαλούνται από φυσικά γεγονότα (όπως η ξηρασία) ή μέτρα ελέγχου του ανθρώπου και μπορεί να επιστρέψει στους αρχικούς του αριθμούς [6, 7]. Επειδή τα εμβόλια κατά του δάγγειου πυρετού εγκρίθηκαν πρόσφατα και δεν υπάρχει ειδική θεραπεία για τον δάγγειο πυρετό, η πρόληψη και η μείωση του κινδύνου μετάδοσης του δάγγειου πυρετού εξαρτάται αποκλειστικά από τον έλεγχο των φορέων των κουνουπιών και την εξάλειψη της ανθρώπινης επαφής με τους φορείς.
Ειδικότερα, η χρήση χημικών ουσιών για τον έλεγχο των κουνουπιών παίζει πλέον σημαντικό ρόλο στη δημόσια υγεία ως σημαντικό συστατικό της ολοκληρωμένης ολοκληρωμένης διαχείρισης φορέων. Οι πιο δημοφιλείς χημικές μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρήση εντομοκτόνων χαμηλής τοξικότητας που δρουν ενάντια στις προνύμφες των κουνουπιών (νυμφοκτόνα) και στα ενήλικα κουνούπια (αντικτόνα). Ο έλεγχος των προνυμφών μέσω της μείωσης της πηγής και της τακτικής χρήσης χημικών προνυμφοκτόνων όπως τα οργανοφωσφορικά και οι ρυθμιστές ανάπτυξης εντόμων θεωρείται σημαντικός. Ωστόσο, οι δυσμενείς περιβαλλοντικές επιπτώσεις που σχετίζονται με τα συνθετικά φυτοφάρμακα και η εντατική και πολύπλοκη συντήρησή τους παραμένουν μια σημαντική ανησυχία [8, 9]. Ο παραδοσιακός έλεγχος ενεργών φορέων, όπως ο έλεγχος ενηλίκων, παραμένει το πιο αποτελεσματικό μέσο ελέγχου κατά τη διάρκεια ιικών εστιών, επειδή μπορεί να εξαλείψει φορείς μολυσματικών ασθενειών γρήγορα και σε μεγάλη κλίμακα, καθώς και να μειώσει τη διάρκεια ζωής και τη μακροζωία των πληθυσμών τοπικών φορέων [3]. , 10]. Τέσσερις κατηγορίες χημικών εντομοκτόνων: οργανοχλωρίδια (αναφέρονται μόνο ως DDT), οργανοφωσφορικά, καρβαμιδικά και πυρεθροειδή αποτελούν τη βάση των προγραμμάτων ελέγχου φορέων, με τα πυρεθροειδή να θεωρούνται η πιο επιτυχημένη κατηγορία. Είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικά ενάντια σε διάφορα αρθρόποδα και έχουν χαμηλή αποτελεσματικότητα. τοξικότητα στα θηλαστικά. Επί του παρόντος, τα συνθετικά πυρεθροειδή αποτελούν την πλειοψηφία των εμπορικών φυτοφαρμάκων, αντιπροσωπεύοντας περίπου το 25% της παγκόσμιας αγοράς φυτοφαρμάκων [11, 12]. Η περμεθρίνη και η δελταμεθρίνη είναι πυρεθροειδή εντομοκτόνα ευρέως φάσματος που χρησιμοποιούνται παγκοσμίως εδώ και δεκαετίες για τον έλεγχο μιας ποικιλίας παρασίτων γεωργικής και ιατρικής σημασίας [13, 14]. Στη δεκαετία του 1950, το DDT επιλέχθηκε ως η χημική ουσία της επιλογής για το εθνικό πρόγραμμα καταπολέμησης κουνουπιών δημόσιας υγείας της Ταϊλάνδης. Μετά την ευρεία χρήση του DDT σε ενδημικές περιοχές της ελονοσίας, η Ταϊλάνδη σταδιακά κατάργησε τη χρήση του DDT μεταξύ 1995 και 2000 και το αντικατέστησε με δύο πυρεθροειδή: την περμεθρίνη και τη δελταμεθρίνη [15, 16]. Αυτά τα πυρεθροειδή εντομοκτόνα εισήχθησαν στις αρχές της δεκαετίας του 1990 για τον έλεγχο της ελονοσίας και του δάγγειου πυρετού, κυρίως μέσω θεραπειών με δίχτυα και χρήσης θερμικής ομίχλης και σπρέι εξαιρετικά χαμηλής τοξικότητας [14, 17]. Ωστόσο, έχουν χάσει την αποτελεσματικότητά τους λόγω της ισχυρής αντοχής στα κουνούπια και της έλλειψης συμμόρφωσης του κοινού λόγω ανησυχιών για τη δημόσια υγεία και τις περιβαλλοντικές επιπτώσεις των συνθετικών χημικών ουσιών. Αυτό θέτει σημαντικές προκλήσεις στην επιτυχία των προγραμμάτων ελέγχου φορέων απειλής [14, 18, 19]. Για να καταστεί η στρατηγική πιο αποτελεσματική, απαιτούνται έγκαιρα και κατάλληλα αντίμετρα. Οι συνιστώμενες διαδικασίες διαχείρισης περιλαμβάνουν υποκατάσταση φυσικών ουσιών, εναλλαγή χημικών διαφορετικών κατηγοριών, προσθήκη συνεργιστικών και ανάμειξη χημικών ή ταυτόχρονη εφαρμογή χημικών διαφορετικών κατηγοριών [14, 20, 21]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη να βρεθεί και να αναπτυχθεί μια φιλική προς το περιβάλλον, βολική και αποτελεσματική εναλλακτική και συνεργιστική και αυτή η μελέτη στοχεύει στην αντιμετώπιση αυτής της ανάγκης.
Τα φυσικά παραγόμενα εντομοκτόνα, ειδικά αυτά που βασίζονται σε φυτικά συστατικά, έχουν δείξει δυνατότητες στην αξιολόγηση των σημερινών και μελλοντικών εναλλακτικών λύσεων καταπολέμησης των κουνουπιών [22, 23, 24]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι είναι δυνατός ο έλεγχος σημαντικών φορέων κουνουπιών με τη χρήση φυτικών προϊόντων, ιδιαίτερα αιθέριων ελαίων (EOs), ως θανάτων ενηλίκων. Ενηλικοκτόνες ιδιότητες κατά ορισμένων σημαντικών ειδών κουνουπιών έχουν βρεθεί σε πολλά φυτικά έλαια όπως το σέλινο, το κύμινο, το ζεδοαρία, ο γλυκάνισος, το πιπέρι, το θυμάρι, το Schinus terebinthifolia, το Cymbopogon citratus, το Cymbopogon schoenanthus, το Cymbopogon giganteus, το Chenopodium ambrosiomiiptus, eticornis . , Eucalyptus citriodora, Cananga odorata και Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Το οξείδιο του αιθυλενίου χρησιμοποιείται πλέον όχι μόνο μόνο του, αλλά και σε συνδυασμό με εκχυλισμένες φυτικές ουσίες ή υπάρχοντα συνθετικά φυτοφάρμακα, παράγοντας διάφορους βαθμούς τοξικότητας. Συνδυασμοί παραδοσιακών εντομοκτόνων όπως οργανοφωσφορικά, καρβαμιδικά και πυρεθροειδή με αιθυλενοξείδιο/φυτικά εκχυλίσματα δρουν συνεργικά ή ανταγωνιστικά στις τοξικές τους επιδράσεις και έχουν αποδειχθεί αποτελεσματικοί έναντι φορέων ασθενειών και παρασίτων [31,32,33,34,35]. Ωστόσο, οι περισσότερες μελέτες σχετικά με τις συνεργιστικές τοξικές επιδράσεις συνδυασμών φυτοχημικών με ή χωρίς συνθετικές χημικές ουσίες έχουν διεξαχθεί σε φορείς γεωργικών εντόμων και παρασίτων και όχι σε κουνούπια σημαντικά ιατρικά. Επιπλέον, το μεγαλύτερο μέρος της εργασίας για τις συνεργιστικές επιδράσεις των συνδυασμών φυτοσυνθετικών εντομοκτόνων κατά των φορέων κουνουπιών έχει επικεντρωθεί στην προνυμφοκτόνο δράση.
Σε μια προηγούμενη μελέτη που διεξήχθη από τους συγγραφείς ως μέρος ενός συνεχιζόμενου ερευνητικού προγράμματος για τον έλεγχο των εκφοβιστικών από αυτόχθονα φυτά τροφίμων στην Ταϊλάνδη, τα οξείδια του αιθυλενίου από το Cyperus rotundus, το galangal και την κανέλα βρέθηκαν να έχουν πιθανή δράση κατά των ενήλικων Aedes. Αίγυπτος [36]. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη είχε στόχο να αξιολογήσει την αποτελεσματικότητα των EOs που απομονώθηκαν από αυτά τα φαρμακευτικά φυτά έναντι των κουνουπιών Aedes. aegypti, συμπεριλαμβανομένων ανθεκτικών στα πυρεθροειδή και ευαίσθητων στελεχών. Η συνεργική δράση των δυαδικών μιγμάτων οξειδίου του αιθυλενίου και συνθετικών πυρεθροειδών με καλή αποτελεσματικότητα σε ενήλικες έχει επίσης αναλυθεί για τη μείωση της χρήσης παραδοσιακών εντομοκτόνων και την αύξηση της αντοχής στους φορείς των κουνουπιών, ειδικά κατά του Aedes. Aedes aegypti. Αυτό το άρθρο αναφέρει τον χημικό χαρακτηρισμό των αποτελεσματικών αιθέριων ελαίων και τις δυνατότητές τους να ενισχύσουν την τοξικότητα της συνθετικής περμεθρίνης κατά των κουνουπιών Aedes. aegypti σε στελέχη ευαίσθητα στα πυρεθροειδή (MCM-S) και ανθεκτικά στελέχη (PMD-R).
Ριζώματα C. rotundus και A. galanga και φλοιός C. verum (Εικ. 1) που χρησιμοποιούνται για την εκχύλιση αιθέριων ελαίων αγοράστηκαν από προμηθευτές φυτικών φαρμάκων στην επαρχία Chiang Mai, Ταϊλάνδη. Η επιστημονική αναγνώριση αυτών των φυτών επιτεύχθηκε μέσω διαβούλευσης με τον κ. James Franklin Maxwell, Herbarium Botanist, Department of Biology, College of Science, Chiang Mai University (CMU), Chiang Mai Province, Ταϊλάνδη, και τον επιστήμονα Wannari Charoensap. στο Τμήμα Φαρμακευτικής του Κολλεγίου Φαρμακευτικής του Πανεπιστημίου Carnegie Mellon, τα δείγματα κουπονιών από κάθε φυτό αποθηκεύονται στο Τμήμα Παρασιτολογίας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Carnegie Mellon για μελλοντική χρήση.
Τα δείγματα φυτών ξηράνθηκαν μεμονωμένα σε σκιά για 3-5 ημέρες σε ανοιχτό χώρο με ενεργό αερισμό και θερμοκρασία περιβάλλοντος περίπου 30 ± 5 °C για να αφαιρεθεί η περιεκτικότητα σε υγρασία πριν από την εκχύλιση των φυσικών αιθέριων ελαίων (EOs). Συνολικά 250 g από κάθε ξηρό φυτικό υλικό αλέστηκαν μηχανικά σε χοντρή σκόνη και χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση αιθέριων ελαίων (EOs) με απόσταξη με ατμό. Η συσκευή απόσταξης αποτελούνταν από έναν ηλεκτρικό θερμαντικό μανδύα, μια φιάλη με στρογγυλό πυθμένα 3000 mL, μια στήλη εξαγωγής, έναν συμπυκνωτή και μια συσκευή Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Τόκιο, Ιαπωνία) . Προσθέστε 1600 ml απεσταγμένου νερού και 10-15 γυάλινες χάντρες στη φιάλη και στη συνέχεια θερμάνετε στους 100°C περίπου χρησιμοποιώντας ηλεκτρική θερμάστρα για τουλάχιστον 3 ώρες έως ότου ολοκληρωθεί η απόσταξη και δεν παράγεται πλέον EO. Η στιβάδα ΕΟ διαχωρίστηκε από την υδατική φάση χρησιμοποιώντας διαχωριστική χοάνη, ξηράνθηκε πάνω από άνυδρο θειικό νάτριο (Na2SO4) και αποθηκεύτηκε σε σφραγισμένη καφέ φιάλη στους 4°C μέχρι να εξεταστεί η χημική σύνθεση και η δραστηριότητα του ενήλικα.
Η χημική σύνθεση των αιθέριων ελαίων πραγματοποιήθηκε ταυτόχρονα με τη βιοδοκιμασία για την ενήλικη ουσία. Η ποιοτική ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα σύστημα GC-MS που αποτελείται από έναν αέριο χρωματογράφο Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) 7890A εξοπλισμένο με έναν τετραπολικό επιλεκτικό ανιχνευτή μάζας (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) και έναν MSD 5975C (EI). ). (Agilent Technologies).
Χρωματογραφική στήλη – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × πάχος φιλμ 0,25 μm). Ο συνολικός χρόνος εκτέλεσης του GC-MS ήταν 20 λεπτά. Οι συνθήκες ανάλυσης είναι ότι οι θερμοκρασίες του εγχυτήρα και της γραμμής μεταφοράς είναι 250 και 280 °C, αντίστοιχα. Η θερμοκρασία του κλιβάνου έχει ρυθμιστεί να αυξάνεται από 50°C σε 250°C με ρυθμό 10°C/min, το φέρον αέριο είναι ήλιο. ρυθμός ροής 1,0 ml/min; ο όγκος έγχυσης είναι 0,2 µL (1/10% κατ' όγκο σε CH2Cl2, αναλογία διαχωρισμού 100:1). Ένα σύστημα ιονισμού ηλεκτρονίων με ενέργεια ιοντισμού 70 eV χρησιμοποιείται για την ανίχνευση GC-MS. Το εύρος λήψης είναι 50–550 μονάδες ατομικής μάζας (amu) και η ταχύτητα σάρωσης είναι 2,91 σαρώσεις ανά δευτερόλεπτο. Τα σχετικά ποσοστά των συστατικών εκφράζονται ως ποσοστά κανονικοποιημένα ανά εμβαδόν κορυφής. Η αναγνώριση των συστατικών EO βασίζεται στον δείκτη κατακράτησης τους (RI). Το RI υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την εξίσωση των Van den Dool και Kratz [37] για τη σειρά ν-αλκανίων (C8-C40) και συγκρίθηκε με δείκτες κατακράτησης από τη βιβλιογραφία [38] και τις βάσεις δεδομένων της βιβλιοθήκης (NIST 2008 και Wiley 8NO8). Η ταυτότητα των ενώσεων που παρουσιάζονται, όπως η δομή και ο μοριακός τύπος, επιβεβαιώθηκε με σύγκριση με διαθέσιμα αυθεντικά δείγματα.
Αναλυτικά πρότυπα για συνθετική περμεθρίνη και πιπερονυλοβουτοξείδιο (PBO, θετικός έλεγχος σε μελέτες συνέργειας) αγοράστηκαν από τη Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Κιτ δοκιμών για ενήλικες του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ) και διαγνωστικές δόσεις χαρτιού εμποτισμένου με περμεθρίνη (0,75%) αγοράστηκαν εμπορικά από το Κέντρο Ελέγχου Φορέων του ΠΟΥ στο Penang της Μαλαισίας. Όλα τα άλλα χημικά και αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής ποιότητας και αγοράστηκαν από τοπικά ιδρύματα στην επαρχία Τσιάνγκ Μάι της Ταϊλάνδης.
Τα κουνούπια που χρησιμοποιήθηκαν ως οργανισμοί δοκιμής στη βιοδοκιμασία ενηλίκων ήταν ελεύθερα ζευγάρωμα εργαστηριακών κουνουπιών Aedes. aegypti, συμπεριλαμβανομένου του ευαίσθητου στελέχους Muang Chiang Mai (MCM-S) και του ανθεκτικού στελέχους Pang Mai Dang (PMD-R). Το στέλεχος MCM-S ελήφθη από τοπικά δείγματα που συλλέχθηκαν στην περιοχή Muang Chiang Mai, επαρχία Chiang Mai, Ταϊλάνδη, και διατηρείται στην εντομολογική αίθουσα του Τμήματος Παρασιτολογίας, CMU School of Medicine, από το 1995 [39]. Το στέλεχος PMD-R, το οποίο βρέθηκε να είναι ανθεκτικό στην περμεθρίνη, απομονώθηκε από κουνούπια αγρού που συλλέχθηκαν αρχικά από το Ban Pang Mai Dang, στην περιοχή Mae Tang, στην επαρχία Chiang Mai, στην Ταϊλάνδη, και διατηρείται στο ίδιο ινστιτούτο από το 1997 [40. ]. Τα στελέχη PMD-R αναπτύχθηκαν υπό εκλεκτική πίεση για να διατηρηθούν τα επίπεδα αντοχής με διαλείπουσα έκθεση σε 0,75% περμεθρίνη χρησιμοποιώντας το κιτ ανίχνευσης της ΠΟΥ με ορισμένες τροποποιήσεις [41]. Κάθε στέλεχος Ae. Το Aedes aegypti αποικίστηκε μεμονωμένα σε εργαστήριο ελεύθερο παθογόνων σε θερμοκρασία 25 ± 2 °C και σχετική υγρασία 80 ± 10% και φωτοπερίοδο φωτός/σκότους 14:10 ωρών. Περίπου 200 προνύμφες κρατήθηκαν σε πλαστικούς δίσκους (μήκους 33 cm, πλάτους 28 cm και ύψος 9 cm) γεμάτους με νερό βρύσης σε πυκνότητα 150-200 προνύμφες ανά δίσκο και τρέφονταν δύο φορές την ημέρα με αποστειρωμένα μπισκότα σκύλου. Τα ενήλικα σκουλήκια διατηρήθηκαν σε υγρά κλουβιά και ταΐζονταν συνεχώς με υδατικό διάλυμα σακχαρόζης 10% και διάλυμα σιροπιού πολυβιταμινών 10%. Τα θηλυκά κουνούπια ρουφούν τακτικά αίμα για να γεννήσουν αυγά. Τα θηλυκά ηλικίας δύο έως πέντε ημερών που δεν έχουν τραφεί με αίμα μπορούν να χρησιμοποιηθούν συνεχώς σε πειραματικές βιολογικές αναλύσεις ενηλίκων.
Πραγματοποιήθηκε βιοδοκιμασία απόκρισης δόσης-θνησιμότητας του EO σε ενήλικα θηλυκά κουνούπια Aedes. aegypti, MCM-S και PMD-R χρησιμοποιώντας τοπική μέθοδο τροποποιημένη σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο του ΠΟΥ για δοκιμές ευαισθησίας [42]. Το EO από κάθε φυτό αραιώθηκε σειριακά με κατάλληλο διαλύτη (π.χ. αιθανόλη ή ακετόνη) για να ληφθεί μια διαβαθμισμένη σειρά 4-6 συγκεντρώσεων. Μετά από αναισθησία με διοξείδιο του άνθρακα (CO2), τα κουνούπια ζυγίστηκαν ξεχωριστά. Τα αναισθητοποιημένα κουνούπια διατηρήθηκαν στη συνέχεια ακίνητα σε στεγνό διηθητικό χαρτί σε προσαρμοσμένη ψυχρή πλάκα κάτω από ένα στερεομικροσκόπιο για να αποφευχθεί η επανενεργοποίηση κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Για κάθε θεραπεία, 0,1 μl διαλύματος EO εφαρμόστηκε στον άνω πρόποδα του θηλυκού χρησιμοποιώντας μικροδιανομέα χειρός Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA). Είκοσι πέντε γυναίκες υποβλήθηκαν σε θεραπεία με κάθε συγκέντρωση, με θνησιμότητα που κυμαίνεται από 10% έως 95% για τουλάχιστον 4 διαφορετικές συγκεντρώσεις. Τα κουνούπια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με διαλύτη χρησίμευσαν ως έλεγχος. Για να αποφύγετε τη μόλυνση των δειγμάτων δοκιμής, αντικαταστήστε το διηθητικό χαρτί με νέο διηθητικό χαρτί για κάθε ΕΟ που ελέγχεται. Οι δόσεις που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις βιοδοκιμές εκφράζονται σε μικρογραμμάρια EO ανά χιλιοστόγραμμο σωματικού βάρους ζωντανής γυναίκας. Η δραστηριότητα PBO ενηλίκων αξιολογήθηκε επίσης με παρόμοιο τρόπο με το EO, με το PBO να χρησιμοποιείται ως θετικός μάρτυρας σε συνεργιστικά πειράματα. Τα κουνούπια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία σε όλες τις ομάδες τοποθετήθηκαν σε πλαστικά κύπελλα και τους χορηγήθηκε 10% σακχαρόζη συν 10% πολυβιταμινούχο σιρόπι. Όλες οι βιοδοκιμές πραγματοποιήθηκαν στους 25 ± 2 °C και 80 ± 10% σχετική υγρασία και επαναλήφθηκαν τέσσερις φορές με τους ελέγχους. Η θνησιμότητα κατά την 24ωρη περίοδο εκτροφής ελέγχθηκε και επιβεβαιώθηκε από την έλλειψη ανταπόκρισης του κουνουπιού στη μηχανική διέγερση και στη συνέχεια καταγράφηκε με βάση τον μέσο όρο των τεσσάρων επαναλήψεων. Οι πειραματικές θεραπείες επαναλήφθηκαν τέσσερις φορές για κάθε δείγμα δοκιμής χρησιμοποιώντας διαφορετικές παρτίδες κουνουπιών. Τα αποτελέσματα συνοψίστηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό του ποσοστού ποσοστού θνησιμότητας, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της θανατηφόρας δόσης 24 ωρών με ανάλυση probit.
Η συνεργιστική αντικτόνος δράση του EO και της περμεθρίνης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια διαδικασία προσδιορισμού τοπικής τοξικότητας [42] όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Χρησιμοποιήστε ακετόνη ή αιθανόλη ως διαλύτη για να παρασκευάσετε την περμεθρίνη στην επιθυμητή συγκέντρωση, καθώς και ένα δυαδικό μείγμα ΕΟ και περμεθρίνης (ΕΟ-περμεθρίνη: περμεθρίνη αναμεμειγμένη με ΕΟ σε συγκέντρωση LD25). Τα κιτ δοκιμής (περμεθρίνη και ΕΟ-περμεθρίνη) αξιολογήθηκαν έναντι στελεχών MCM-S και PMD-R του Ae. Aedes aegypti. Σε καθένα από τα 25 θηλυκά κουνούπια δόθηκαν τέσσερις δόσεις περμεθρίνης για να δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητά του στη θανάτωση ενηλίκων, με κάθε θεραπεία να επαναλαμβάνεται τέσσερις φορές. Για τον εντοπισμό υποψήφιων συνεργιστών ΕΟ, 4 έως 6 δόσεις ΕΟ-περμεθρίνης χορηγήθηκαν σε καθένα από τα 25 θηλυκά κουνούπια, με κάθε εφαρμογή να επαναλαμβάνεται τέσσερις φορές. Η επεξεργασία με ΡΒΟ-περμεθρίνη (περμεθρίνη αναμεμειγμένη με συγκέντρωση LD25 του ΡΒΟ) χρησίμευσε επίσης ως θετικός έλεγχος. Οι δόσεις που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις βιοδοκιμές εκφράζονται σε νανογραμμάρια δείγματος δοκιμής ανά χιλιοστόγραμμο βάρους ζωντανού θηλυκού σώματος. Τέσσερις πειραματικές αξιολογήσεις για κάθε στέλεχος κουνουπιών διεξήχθησαν σε παρτίδες που εκτρέφονταν μεμονωμένα και τα δεδομένα θνησιμότητας συγκεντρώθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Probit για να προσδιοριστεί μια θανατηφόρα δόση 24 ωρών.
Το ποσοστό θνησιμότητας προσαρμόστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο Abbott [43]. Τα προσαρμοσμένα δεδομένα αναλύθηκαν με ανάλυση παλινδρόμησης Probit χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα στατιστικών υπολογιστών SPSS (έκδοση 19.0). Θανατηφόρες τιμές 25%, 50%, 90%, 95% και 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 και LD99, αντίστοιχα) υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% CI). Οι μετρήσεις της σημασίας και οι διαφορές μεταξύ των δειγμάτων δοκιμής αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή chi-square ή τη δοκιμή Mann-Whitney U σε κάθε βιολογικό προσδιορισμό. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικά στο P< 0,05. Ο συντελεστής αντίστασης (RR) υπολογίζεται στο επίπεδο LD50 χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο [12]:
RR > 1 υποδηλώνει αντίσταση και RR ≤ 1 υποδηλώνει ευαισθησία. Η τιμή του λόγου συνεργίας (SR) για κάθε υποψήφιο συνεργιστή υπολογίζεται ως εξής [34, 35, 44]:
Αυτός ο παράγοντας διαιρεί τα αποτελέσματα σε τρεις κατηγορίες: μια τιμή SR 1±0,05 θεωρείται ότι δεν έχει εμφανές αποτέλεσμα, μια τιμή SR >1,05 θεωρείται ότι έχει συνεργική δράση και μια τιμή SR για ένα ανοιχτό κίτρινο υγρό λάδι μπορεί να είναι που λαμβάνεται με απόσταξη με ατμό των ριζωμάτων του C. rotundus και του A. galanga και του φλοιού του C. verum. Οι αποδόσεις που υπολογίστηκαν σε ξηρό βάρος ήταν 0,15%, 0,27% (β/β) και 0,54% (ν/ν). w) αντίστοιχα (Πίνακας 1). Η μελέτη GC-MS της χημικής σύστασης των ελαίων των C. rotundus, A. galanga και C. verum έδειξε την παρουσία 19, 17 και 21 ενώσεων, οι οποίες αντιπροσώπευαν το 80,22, 86,75 και 97,24% όλων των συστατικών, αντίστοιχα (Πίνακας 2 ). Οι ενώσεις του ελαίου του ριζώματος C. lucidum αποτελούνται κυρίως από κυπερονένιο (14,04%), ακολουθούμενο από το καραλένιο (9,57%), την α-καψελάνη (7,97%) και την α-καψελάνη (7,53%). Το κύριο χημικό συστατικό του ελαίου ριζώματος galangal είναι το β-δισαβολένιο (18,27%), ακολουθούμενο από το α-περγαμοτένιο (16,28%), την 1,8-κινεόλη (10,17%) και την πιπερονόλη (10,09%). Ενώ η κινναμαλδεΰδη (64,66%) αναγνωρίστηκε ως το κύριο συστατικό του ελαίου φλοιού C. verum, η οξική κινναμική (6,61%), η α-κοπαένιο (5,83%) και η 3-φαινυλοπροπιοναλδεΰδη (4,09%) θεωρήθηκαν δευτερεύοντα συστατικά. Οι χημικές δομές του κυπερνίου, του β-δισαβολενίου και της κινναμαλδεΰδης είναι οι κύριες ενώσεις των C. rotundus, A. galanga και C. verum, αντίστοιχα, όπως φαίνεται στο Σχήμα 2.
Τα αποτελέσματα από τρία OO αξιολόγησαν τη δραστηριότητα των ενηλίκων κατά των κουνουπιών Aedes. Τα κουνούπια aegypti φαίνονται στον Πίνακα 3. Όλα τα EOs βρέθηκαν να έχουν θανατηφόρα αποτελέσματα στα κουνούπια MCM-S Aedes σε διαφορετικούς τύπους και δόσεις. Aedes aegypti. Το πιο αποτελεσματικό EO είναι το C. verum, ακολουθούμενο από το A. galanga και το C. rotundus με τιμές LD50 3,30, 7,97 και 10,05 μg/mg για τα θηλυκά MCM-S αντίστοιχα, ελαφρώς υψηλότερα από 3,22 (U = 1 ), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) και 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD -R στις γυναίκες. Αυτό αντιστοιχεί στο PBO που έχει ελαφρώς υψηλότερη επίδραση στους ενήλικες στο PMD-R από το στέλεχος MSM-S, με τιμές LD50 4,79 και 6,30 μg/mg θηλυκών, αντίστοιχα (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057 ) . ). Μπορεί να υπολογιστεί ότι οι τιμές LD50 των C. verum, A. galanga, C. rotundus και PBO έναντι του PMD-R είναι περίπου 0,98, 0,99, 0,95 και 0,76 φορές χαμηλότερες από εκείνες έναντι του MCM-S, αντίστοιχα. Έτσι, αυτό δείχνει ότι η ευαισθησία σε PBO και EO είναι σχετικά παρόμοια μεταξύ των δύο στελεχών Aedes. Αν και το PMD-R ήταν πιο ευαίσθητο από το MCM-S, η ευαισθησία του Aedes aegypti δεν ήταν σημαντική. Αντίθετα, τα δύο στελέχη Aedes διέφεραν πολύ ως προς την ευαισθησία τους στην περμεθρίνη. aegypti (Πίνακας 4). Το PMD-R έδειξε σημαντική αντοχή στην περμεθρίνη (τιμή LD50 = 0,44 ng/mg στις γυναίκες) με υψηλότερη τιμή LD50 3,70 σε σύγκριση με το MCM-S (τιμή LD50 = 0,44 ng/mg στις γυναίκες) ng/mg στις γυναίκες (U = 0, Ζ = -2,309, Ρ = 0,029). Αν και το PMD-R είναι πολύ λιγότερο ευαίσθητο στην περμεθρίνη από το MCM-S, η ευαισθησία του στα έλαια PBO και C. verum, A. galanga και C. rotundus είναι ελαφρώς υψηλότερη από το MCM-S.
Όπως παρατηρήθηκε στη βιοδοκιμασία του πληθυσμού ενηλίκων του συνδυασμού ΕΟ-περμεθρίνης, τα δυαδικά μείγματα περμεθρίνης και ΕΟ (LD25) έδειξαν είτε συνέργεια (τιμή SR > 1,05) είτε καμία επίδραση (τιμή SR = 1 ± 0,05). Σύνθετες ενήλικες επιδράσεις ενός μείγματος ΕΟ-περμεθρίνης σε πειραματικά κουνούπια αλμπίνο. Τα στελέχη MCM-S και PMD-R Aedes aegypti φαίνονται στον Πίνακα 4 και στο Σχήμα 3. Η προσθήκη ελαίου C. verum βρέθηκε να μειώνει ελαφρά την LD50 της περμεθρίνης έναντι του MCM-S και ελαφρώς αυξάνει την LD50 έναντι του PMD-R σε 0,44– 0,42 ng/mg στις γυναίκες και από 3,70 έως 3,85 ng/mg στις γυναίκες, αντίστοιχα. Αντίθετα, η προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga μείωσε σημαντικά την LD50 της περμεθρίνης στο MCM-S από 0,44 σε 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και σε 0,11 (U = 0). , Ζ) = -2,309, Ρ = 0,029) ng/mg γυναικών. Με βάση τις τιμές LD50 του MCM-S, οι τιμές SR του μίγματος EO-permethrin μετά την προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga ήταν 6,28 και 4,00, αντίστοιχα. Αντίστοιχα, η LD50 της περμεθρίνης έναντι του PMD-R μειώθηκε σημαντικά από 3,70 σε 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και σε 0,003 με την προσθήκη ελαίων C. rotundus και A. galanga (U = 0 ) . Ζ = -2,337, Ρ = 0,029) ng/mg θηλυκού. Η τιμή SR της περμεθρίνης σε συνδυασμό με το C. rotundus έναντι του PMD-R ήταν 8,81, ενώ η τιμή SR του μίγματος γαλαγκάλη-περμεθρίνης ήταν 1233,33. Σε σχέση με το MCM-S, η τιμή LD50 του PBO θετικού μάρτυρα μειώθηκε από 0,44 σε 0,26 ng/mg (θηλυκά) και από 3,70 ng/mg (θηλυκά) σε 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) και PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Οι τιμές SR του μίγματος PBO-περμεθρίνης για τα στελέχη MCM-S και PMD-R ήταν 1,69 και 5,69, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι τα έλαια C. rotundus και A. galanga και το PBO ενισχύουν την τοξικότητα της περμεθρίνης σε μεγαλύτερο βαθμό από το έλαιο C. verum για τα στελέχη MCM-S και PMD-R.
Δραστηριότητα ενηλίκων (LD50) EO, PBO, permethrin (PE) και οι συνδυασμοί τους έναντι ευαίσθητων σε πυρεθροειδών (MCM-S) και ανθεκτικών (PMD-R) στελεχών των κουνουπιών Aedes. Aedes aegypti
[45]. Τα συνθετικά πυρεθροειδή χρησιμοποιούνται παγκοσμίως για τον έλεγχο σχεδόν όλων των αρθρόποδων γεωργικής και ιατρικής σημασίας. Ωστόσο, λόγω των επιβλαβών συνεπειών της χρήσης συνθετικών εντομοκτόνων, ιδιαίτερα όσον αφορά την ανάπτυξη και την ευρεία αντοχή των κουνουπιών, καθώς και τις επιπτώσεις στη μακροπρόθεσμη υγεία και το περιβάλλον, υπάρχει πλέον επείγουσα ανάγκη μείωσης της χρήσης παραδοσιακών συνθετικών εντομοκτόνων και να αναπτύξουν εναλλακτικές λύσεις [35, 46, 47]. Εκτός από την προστασία του περιβάλλοντος και της ανθρώπινης υγείας, τα πλεονεκτήματα των βοτανικών εντομοκτόνων περιλαμβάνουν υψηλή επιλεκτικότητα, παγκόσμια διαθεσιμότητα και ευκολία παραγωγής και χρήσης, καθιστώντας τα πιο ελκυστικά για τον έλεγχο των κουνουπιών [32,48, 49]. Αυτή η μελέτη, εκτός από την αποσαφήνιση των χημικών χαρακτηριστικών των αποτελεσματικών αιθέριων ελαίων μέσω της ανάλυσης GC-MS, αξιολόγησε επίσης την ισχύ των αιθέριων ελαίων ενηλίκων και την ικανότητά τους να ενισχύουν την τοξικότητα της συνθετικής περμεθρίνης. aegypti σε στελέχη ευαίσθητα στα πυρεθροειδή (MCM-S) και ανθεκτικά στελέχη (PMD-R).
Ο χαρακτηρισμός GC-MS έδειξε ότι το cypern (14,04%), το β-δισαβολένιο (18,27%) και η κινναμαλδεΰδη (64,66%) ήταν τα κύρια συστατικά των ελαίων C. rotundus, A. galanga και C. verum, αντίστοιχα. Αυτές οι χημικές ουσίες έχουν επιδείξει ποικίλες βιολογικές δραστηριότητες. Οι Ahn et al. [50] ανέφερε ότι το 6-ακετοξυκυπερένιο, που απομονώθηκε από το ρίζωμα του C. rotundus, δρα ως αντικαρκινική ένωση και μπορεί να προκαλέσει απόπτωση εξαρτώμενη από κασπάση στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Το β-δισαβολένιο, που εκχυλίζεται από το αιθέριο έλαιο του δέντρου μύρου, εμφανίζει ειδική κυτταροτοξικότητα έναντι των καρκινικών κυττάρων του μαστού ανθρώπου και ποντικού τόσο in vitro όσο και in vivo [51]. Η κινναμαλδεΰδη, που λαμβάνεται από φυσικά εκχυλίσματα ή συντίθεται στο εργαστήριο, έχει αναφερθεί ότι έχει εντομοκτόνο, αντιβακτηριδιακή, αντιμυκητιακή, αντιφλεγμονώδη, ανοσοτροποποιητική, αντικαρκινική και αντιαγγειογενετική δράση [52].
Τα αποτελέσματα της δοσοεξαρτώμενης βιοδοκιμασίας δραστηριότητας ενηλίκων έδειξαν καλές δυνατότητες των ελεγχόμενων EOs και έδειξαν ότι τα στελέχη κουνουπιών Aedes MCM-S και PMD-R είχαν παρόμοια ευαισθησία σε EO και PBO. Aedes aegypti. Η σύγκριση της αποτελεσματικότητας της EO και της περμεθρίνης έδειξε ότι η τελευταία έχει ισχυρότερη αλλεργιοκτόνο δράση: οι τιμές LD50 είναι 0,44 και 3,70 ng/mg στις γυναίκες για τα στελέχη MCM-S και PMD-R, αντίστοιχα. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζονται από πολλές μελέτες που δείχνουν ότι τα φυσικά φυτοφάρμακα, ειδικά τα φυτικά προϊόντα, είναι γενικά λιγότερο αποτελεσματικά από τις συνθετικές ουσίες [31, 34, 35, 53, 54]. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο ότι το πρώτο είναι ένας πολύπλοκος συνδυασμός ενεργών ή ανενεργών συστατικών, ενώ το δεύτερο είναι μια καθαρισμένη μονή δραστική ένωση. Ωστόσο, η ποικιλομορφία και η πολυπλοκότητα των φυσικών δραστικών συστατικών με διαφορετικούς μηχανισμούς δράσης μπορεί να ενισχύσει τη βιολογική δραστηριότητα ή να εμποδίσει την ανάπτυξη αντοχής στους πληθυσμούς ξενιστές [55, 56, 57]. Πολλοί ερευνητές έχουν αναφέρει τη δυνατότητα κατά των κουνουπιών των C. verum, A. galanga και C. rotundus και των συστατικών τους όπως το β-δισαβολένιο, η κινναμαλδεΰδη και η 1,8-κινεόλη [22, 36, 58, 59, 60,61, 62,63,64]. Ωστόσο, μια ανασκόπηση της βιβλιογραφίας αποκάλυψε ότι δεν έχουν υπάρξει προηγούμενες αναφορές για τη συνεργιστική του δράση με την περμεθρίνη ή άλλα συνθετικά εντομοκτόνα κατά των κουνουπιών Aedes. Aedes aegypti.
Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην ευαισθησία στην περμεθρίνη μεταξύ των δύο στελεχών Aedes. Aedes aegypti. Το MCM-S είναι ευαίσθητο στην περμεθρίνη, ενώ το PMD-R είναι πολύ λιγότερο ευαίσθητο σε αυτήν, με ποσοστό αντίστασης 8,41. Σε σύγκριση με την ευαισθησία του MCM-S, το PMD-R είναι λιγότερο ευαίσθητο στην περμεθρίνη αλλά πιο ευαίσθητο στην EO, παρέχοντας βάση για περαιτέρω μελέτες που στοχεύουν στην αύξηση της αποτελεσματικότητας της περμεθρίνης συνδυάζοντάς την με EO. Μια συνεργιστική βιοδοκιμασία βασισμένη σε συνδυασμό για επιδράσεις σε ενήλικες έδειξε ότι τα δυαδικά μείγματα EO και περμεθρίνης μείωσαν ή αύξησαν τη θνησιμότητα των ενηλίκων Aedes. Aedes aegypti. Η προσθήκη ελαίου C. verum μείωσε ελαφρώς το LD50 της περμεθρίνης έναντι του MCM-S αλλά αύξησε ελαφρώς το LD50 έναντι του PMD-R με τιμές SR 1,05 και 0,96, αντίστοιχα. Αυτό υποδεικνύει ότι το έλαιο C. verum δεν έχει συνεργική ή ανταγωνιστική επίδραση στην περμεθρίνη όταν δοκιμάζεται σε MCM-S και PMD-R. Αντίθετα, τα έλαια C. rotundus και A. galanga έδειξαν σημαντική συνεργική δράση μειώνοντας σημαντικά τις τιμές LD50 της περμεθρίνης σε MCM-S ή PMD-R. Όταν η περμεθρίνη συνδυάστηκε με EO του C. rotundus και του A. galanga, οι τιμές SR του μείγματος EO-permethrin για το MCM-S ήταν 6,28 και 4,00, αντίστοιχα. Επιπλέον, όταν η περμεθρίνη αξιολογήθηκε έναντι του PMD-R σε συνδυασμό με C. rotundus (SR = 8,81) ή A. galanga (SR = 1233,33), οι τιμές SR αυξήθηκαν σημαντικά. Αξίζει να σημειωθεί ότι τόσο το C. rotundus όσο και το A. galanga ενίσχυσαν την τοξικότητα της περμεθρίνης έναντι του PMD-R Ae. Αίγυπτος σημαντικά. Ομοίως, το PBO βρέθηκε να αυξάνει την τοξικότητα της περμεθρίνης με τιμές SR 1,69 και 5,69 για τα στελέχη MCM-S και PMD-R, αντίστοιχα. Δεδομένου ότι το C. rotundus και το A. galanga είχαν τις υψηλότερες τιμές SR, θεωρήθηκαν ότι ήταν οι καλύτεροι συνεργιστές στην ενίσχυση της τοξικότητας της περμεθρίνης στο MCM-S και στο PMD-R, αντίστοιχα.
Αρκετές προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει τη συνεργιστική επίδραση συνδυασμών συνθετικών εντομοκτόνων και φυτικών εκχυλισμάτων κατά διαφόρων ειδών κουνουπιών. Μια προνυμφοκτόνος βιοδοκιμασία κατά του Anopheles Stephensi που μελετήθηκε από τους Kalayanasundaram και Das [65] έδειξε ότι το fenthion, ένα οργανοφωσφορικό ευρέως φάσματος, συσχετίστηκε με το Cleodendron inerme, το Pedalium murax και το Parthenium hysterophorus. Παρατηρήθηκε σημαντική συνέργεια μεταξύ των εκχυλισμάτων με συνεργιστική δράση (SF) 1,31. , 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 και 2,23, αντίστοιχα. Σε μια προνυμφοκτόνο διαλογή 15 ειδών μαγγροβίων, το εκχύλισμα πετρελαϊκού αιθέρα από στιλβωμένες ρίζες μαγγρόβιου βρέθηκε ότι είναι πιο αποτελεσματικό έναντι του Culex quinquefasciatus με τιμή LC50 25,7 mg/L [66]. Η συνεργική επίδραση αυτού του εκχυλίσματος και του βοτανικού εντομοκτόνου pyrethrum αναφέρθηκε επίσης ότι μειώνει την LC50 του πύρεθρου έναντι των προνυμφών C. quinquefasciatus από 0,132 mg/L σε 0,107 mg/L, επιπλέον, σε αυτή τη μελέτη χρησιμοποιήθηκε υπολογισμός SF 1,23. 34,35,44]. Αξιολογήθηκε η συνδυασμένη αποτελεσματικότητα του εκχυλίσματος ρίζας εσπεριδοειδών Solanum και πολλών συνθετικών εντομοκτόνων (π.χ. fenthion, cypermethrin (ένα συνθετικό πυρεθροειδές) και timethphos (ένα οργανοφωσφορικό προνυμφοκτόνο)) έναντι των κουνουπιών Anopheles. Stephensi [54] και C. quinquefasciatus [34]. Η συνδυασμένη χρήση κυπερμεθρίνης και εκχυλίσματος πετρελαϊκού αιθέρα κίτρινων φρούτων έδειξε συνεργιστική επίδραση στην κυπερμεθρίνη σε όλες τις αναλογίες. Η πιο αποτελεσματική αναλογία ήταν ο δυαδικός συνδυασμός 1:1 με τιμές LC50 και SF 0,0054 ppm και 6,83, αντίστοιχα, σε σχέση με το An. Stephen West[54]. Ενώ ένα δυαδικό μείγμα S.xanthocarpum και temephos 1:1 ήταν ανταγωνιστικό (SF = 0,6406), ο συνδυασμός S.xanthocarpum-fenthion (1:1) έδειξε συνεργιστική δράση έναντι του C. quinquefasciatus με SF 1,3125 [34]. Οι Tong και Blomquist [35] μελέτησαν τις επιδράσεις του φυτικού αιθυλενοξειδίου στην τοξικότητα του καρβαρυλίου (καρβαμιδικού ευρέως φάσματος) και της περμεθρίνης στα κουνούπια Aedes. Aedes aegypti. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το οξείδιο του αιθυλενίου από το άγαρ, το μαύρο πιπέρι, τον άρκευθο, το ελίχρυσο, το σανταλόξυλο και το σουσάμι αύξησαν την τοξικότητα του καρβαρυλίου στα κουνούπια Aedes. Οι τιμές SR των προνυμφών aegypti ποικίλλουν από 1,0 έως 7,0. Αντίθετα, κανένα από τα EO δεν ήταν τοξικό για τα ενήλικα κουνούπια Aedes. Σε αυτό το στάδιο, δεν έχουν αναφερθεί συνεργιστικές επιδράσεις για τον συνδυασμό Aedes aegypti και EO-carbaryl. Το PBO χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας για την ενίσχυση της τοξικότητας του καρβαρυλίου έναντι των κουνουπιών Aedes. Οι τιμές SR των προνυμφών Aedes aegypti και των ενηλίκων είναι 4,9-9,5 και 2,3, αντίστοιχα. Μόνο δυαδικά μείγματα περμεθρίνης και EO ή PBO δοκιμάστηκαν για προνυμφοκτόνο δράση. Το μίγμα ΕΟ-περμεθρίνης είχε ανταγωνιστική δράση, ενώ το μίγμα ΡΒΟ-περμεθρίνης είχε συνεργική δράση κατά των κουνουπιών Aedes. Προνύμφες Aedes aegypti. Ωστόσο, δεν έχουν διεξαχθεί ακόμη πειράματα απόκρισης δόσης και αξιολόγηση SR για μείγματα PBO-permethrin. Αν και λίγα αποτελέσματα έχουν επιτευχθεί σχετικά με τις συνεργιστικές επιδράσεις των φυτοσυνθετικών συνδυασμών κατά των φορέων κουνουπιών, αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν τα υπάρχοντα αποτελέσματα, τα οποία ανοίγουν την προοπτική προσθήκης συνεργιστικών όχι μόνο για τη μείωση της εφαρμοζόμενης δόσης, αλλά και για την αύξηση της θανάτωσης. Αποτελεσματικότητα των εντόμων. Επιπλέον, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν για πρώτη φορά ότι τα έλαια C. rotundus και A. galanga ασκούν συνεργικά σημαντικά υψηλότερη αποτελεσματικότητα έναντι ευαίσθητων σε πυρεθροειδών και ανθεκτικών σε πυρεθροειδών στελεχών κουνουπιών Aedes σε σύγκριση με PBO όταν συνδυάζονται με τοξικότητα περμεθρίνης. Aedes aegypti. Ωστόσο, απροσδόκητα αποτελέσματα από τη συνεργιστική ανάλυση έδειξαν ότι το έλαιο C. verum είχε τη μεγαλύτερη δράση κατά των ενηλίκων έναντι και των δύο στελεχών Aedes. Παραδόξως, η τοξική επίδραση της περμεθρίνης στο Aedes aegypti δεν ήταν ικανοποιητική. Οι παραλλαγές στις τοξικές επιδράσεις και στις συνεργιστικές επιδράσεις μπορεί να οφείλονται εν μέρει στην έκθεση σε διαφορετικούς τύπους και επίπεδα βιοδραστικών συστατικών σε αυτά τα έλαια.
Παρά τις προσπάθειες κατανόησης του τρόπου βελτίωσης της αποτελεσματικότητας, οι συνεργιστικοί μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς. Πιθανοί λόγοι για τη διαφορετική αποτελεσματικότητα και τη δυνατότητα συνεργίας μπορεί να περιλαμβάνουν διαφορές στη χημική σύνθεση των προϊόντων που δοκιμάστηκαν και διαφορές στην ευαισθησία στα κουνούπια που σχετίζονται με την κατάσταση και την ανάπτυξη αντοχής. Υπάρχουν διαφορές μεταξύ των κύριων και των δευτερευόντων συστατικών οξειδίου του αιθυλενίου που δοκιμάστηκαν σε αυτή τη μελέτη και ορισμένες από αυτές τις ενώσεις έχει αποδειχθεί ότι έχουν απωθητικές και τοξικές επιδράσεις έναντι διαφόρων παρασίτων και φορέων ασθενειών [61,62,64,67,68]. Ωστόσο, οι κύριες ενώσεις που χαρακτηρίζονται στα έλαια C. rotundus, A. galanga και C. verum, όπως το cypern, το β-δισαβολένιο και η κινναμαλδεΰδη, δεν δοκιμάστηκαν σε αυτό το άρθρο για τις αντι-ενήλικες και συνεργιστικές τους δράσεις έναντι του Ae, αντίστοιχα. Aedes aegypti. Ως εκ τούτου, απαιτούνται μελλοντικές μελέτες για την απομόνωση των δραστικών συστατικών που υπάρχουν σε κάθε αιθέριο έλαιο και την αποσαφήνιση της εντομοκτόνου αποτελεσματικότητάς τους και των συνεργιστικών αλληλεπιδράσεων έναντι αυτού του φορέα κουνουπιών. Γενικά, η εντομοκτόνος δράση εξαρτάται από τη δράση και την αντίδραση μεταξύ των δηλητηρίων και των ιστών των εντόμων, η οποία μπορεί να απλοποιηθεί και να χωριστεί σε τρία στάδια: διείσδυση στο δέρμα του σώματος του εντόμου και στις μεμβράνες του οργάνου στόχου, ενεργοποίηση (= αλληλεπίδραση με τον στόχο) και αποτοξίνωση. τοξικές ουσίες [57, 69]. Επομένως, η συνέργεια με εντομοκτόνα που οδηγεί σε αυξημένη αποτελεσματικότητα τοξικών συνδυασμών απαιτεί τουλάχιστον μία από αυτές τις κατηγορίες, όπως αυξημένη διείσδυση, μεγαλύτερη ενεργοποίηση συσσωρευμένων ενώσεων ή λιγότερο μειωμένη αποτοξίνωση του δραστικού συστατικού φυτοφαρμάκου. Για παράδειγμα, η ενεργειακή ανοχή καθυστερεί τη διείσδυση της επιδερμίδας μέσω μιας παχύρρευστης επιδερμίδας και τη βιοχημική αντίσταση, όπως ο ενισχυμένος μεταβολισμός των εντομοκτόνων που παρατηρείται σε ορισμένα ανθεκτικά στελέχη εντόμων [70, 71]. Η σημαντική αποτελεσματικότητα των EOs στην αύξηση της τοξικότητας της περμεθρίνης, ειδικά έναντι του PMD-R, μπορεί να υποδεικνύει μια λύση στο πρόβλημα της αντοχής στα εντομοκτόνα αλληλεπιδρώντας με μηχανισμούς αντοχής [57, 69, 70, 71]. Οι Tong και Blomquist [35] υποστήριξαν τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης επιδεικνύοντας μια συνεργιστική αλληλεπίδραση μεταξύ EOs και συνθετικών φυτοφαρμάκων. aegypti, υπάρχουν ενδείξεις ανασταλτικής δράσης έναντι των αποτοξινωτικών ενζύμων, συμπεριλαμβανομένων των μονοοξυγενασών του κυτοχρώματος P450 και των καρβοξυλεστερασών, που συνδέονται στενά με την ανάπτυξη αντοχής στα παραδοσιακά φυτοφάρμακα. Το PBO δεν λέγεται μόνο ότι είναι ένας μεταβολικός αναστολέας της μονοοξυγενάσης του κυτοχρώματος P450, αλλά βελτιώνει επίσης τη διείσδυση των εντομοκτόνων, όπως αποδεικνύεται από τη χρήση του ως θετικού ελέγχου σε συνεργιστικές μελέτες [35, 72]. Είναι ενδιαφέρον ότι η 1,8-κινεόλη, ένα από τα σημαντικά συστατικά που βρίσκονται στο έλαιο galangal, είναι γνωστή για τις τοξικές της επιδράσεις στα είδη εντόμων [22, 63, 73] και έχει αναφερθεί ότι έχει συνεργιστικές επιδράσεις σε αρκετούς τομείς της έρευνας βιολογικής δραστηριότητας. 74]. . ,75,76,77]. Επιπλέον, η 1,8-κινεόλη σε συνδυασμό με διάφορα φάρμακα, όπως η κουρκουμίνη [78], η 5-φθοροουρακίλη [79], το μεφαιναμικό οξύ [80] και η ζιδοβουδίνη [81] έχει επίσης μια δράση προαγωγής της διείσδυσης. in vitro. Έτσι, ο πιθανός ρόλος της 1,8-κινεόλης στη συνεργική εντομοκτόνο δράση δεν είναι μόνο ως ενεργό συστατικό αλλά και ως ενισχυτικό διείσδυσης. Λόγω της μεγαλύτερης συνεργίας με την περμεθρίνη, ιδιαίτερα έναντι του PMD-R, οι συνεργικές επιδράσεις του ελαίου γαλάγγαλου και του ελαίου τριχοσανθές που παρατηρήθηκαν σε αυτή τη μελέτη μπορεί να προκύψουν από αλληλεπιδράσεις με μηχανισμούς αντοχής, π.χ. αυξημένη διαπερατότητα στο χλώριο. Τα πυρεθροειδή αυξάνουν την ενεργοποίηση των συσσωρευμένων ενώσεων και αναστέλλουν τα αποτοξινωτικά ένζυμα όπως οι μονοοξυγενάσες του κυτοχρώματος P450 και οι καρβοξυλεστεράσες. Ωστόσο, αυτές οι πτυχές απαιτούν περαιτέρω μελέτη για να αποσαφηνιστεί ο ειδικός ρόλος της ΕΟ και των απομονωμένων ενώσεων της (μόνων ή σε συνδυασμό) στους συνεργιστικούς μηχανισμούς.
Το 1977, αναφέρθηκαν αυξανόμενα επίπεδα αντίστασης στην περμεθρίνη σε μεγάλους πληθυσμούς φορέων στην Ταϊλάνδη και τις επόμενες δεκαετίες, η χρήση της περμεθρίνης αντικαταστάθηκε σε μεγάλο βαθμό από άλλες πυρεθροειδείς χημικές ουσίες, ειδικά αυτές που αντικαταστάθηκαν από τη δελταμεθρίνη [82]. Ωστόσο, η αντοχή του φορέα στη δελταμεθρίνη και σε άλλες κατηγορίες εντομοκτόνων είναι εξαιρετικά κοινή σε ολόκληρη τη χώρα λόγω υπερβολικής και επίμονης χρήσης [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Για την καταπολέμηση αυτού του προβλήματος, συνιστάται η εναλλαγή ή η επαναχρησιμοποίηση απορριπτόμενων φυτοφαρμάκων που ήταν προηγουμένως αποτελεσματικά και λιγότερο τοξικά για τα θηλαστικά, όπως η περμεθρίνη. Επί του παρόντος, αν και η χρήση της περμεθρίνης έχει μειωθεί στα πρόσφατα εθνικά κυβερνητικά προγράμματα καταπολέμησης των κουνουπιών, η αντοχή στην περμεθρίνη μπορεί ακόμα να βρεθεί σε πληθυσμούς κουνουπιών. Αυτό μπορεί να οφείλεται στην έκθεση των κουνουπιών σε εμπορικά οικιακά προϊόντα ελέγχου παρασίτων, τα οποία αποτελούνται κυρίως από περμεθρίνη και άλλα πυρεθροειδή [14, 17]. Έτσι, η επιτυχής επαναχρησιμοποίηση της περμεθρίνης απαιτεί την ανάπτυξη και εφαρμογή στρατηγικών για τη μείωση της αντίστασης του φορέα. Αν και κανένα από τα αιθέρια έλαια που δοκιμάστηκαν μεμονωμένα σε αυτή τη μελέτη δεν ήταν τόσο αποτελεσματικό όσο η περμεθρίνη, η συνεργασία με την περμεθρίνη είχε ως αποτέλεσμα εντυπωσιακά συνεργιστικά αποτελέσματα. Αυτή είναι μια πολλά υποσχόμενη ένδειξη ότι η αλληλεπίδραση της EO με τους μηχανισμούς αντοχής έχει ως αποτέλεσμα ο συνδυασμός της περμεθρίνης με την EO να είναι πιο αποτελεσματικός από το εντομοκτόνο ή το EO μόνο του, ιδιαίτερα έναντι του PMD-R Ae. Aedes aegypti. Τα οφέλη των συνεργιστικών μειγμάτων στην αύξηση της αποτελεσματικότητας, παρά τη χρήση χαμηλότερων δόσεων για τον έλεγχο του φορέα, μπορεί να οδηγήσουν σε βελτιωμένη διαχείριση της αντίστασης και μειωμένο κόστος [33, 87]. Από αυτά τα αποτελέσματα, είναι ευχάριστο να σημειωθεί ότι τα A. galanga και C. rotundus EOs ήταν σημαντικά πιο αποτελεσματικά από το PBO στη συνέργεια της τοξικότητας της περμεθρίνης και στα δύο στελέχη MCM-S και PMD-R και αποτελούν πιθανή εναλλακτική στα παραδοσιακά εργογονικά βοηθήματα.
Τα επιλεγμένα EOs είχαν σημαντικά συνεργιστικά αποτελέσματα στην ενίσχυση της τοξικότητας των ενηλίκων έναντι του PMD-R Ae. Το aegypti, ειδικά το πετρέλαιο galangal, έχει τιμή SR έως και 1233,33, υποδεικνύοντας ότι το EO έχει πολλές υποσχέσεις ως συνεργιστικό για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας της περμεθρίνης. Αυτό μπορεί να τονώσει τη χρήση ενός νέου ενεργού φυσικού προϊόντος, το οποίο μαζί θα μπορούσε να αυξήσει τη χρήση εξαιρετικά αποτελεσματικών προϊόντων καταπολέμησης των κουνουπιών. Αποκαλύπτει επίσης τη δυνατότητα του οξειδίου του αιθυλενίου ως εναλλακτικού συνεργιστικού παράγοντα για αποτελεσματική βελτίωση παλαιότερων ή παραδοσιακών εντομοκτόνων για την αντιμετώπιση υφιστάμενων προβλημάτων αντοχής σε πληθυσμούς κουνουπιών. Η χρήση άμεσα διαθέσιμων φυτών σε προγράμματα καταπολέμησης κουνουπιών όχι μόνο μειώνει την εξάρτηση από εισαγόμενα και ακριβά υλικά, αλλά επίσης τονώνει τις τοπικές προσπάθειες για την ενίσχυση των συστημάτων δημόσιας υγείας.
Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ξεκάθαρα τη σημαντική συνεργιστική επίδραση που παράγεται από τον συνδυασμό αιθυλενοξειδίου και περμεθρίνης. Τα αποτελέσματα υπογραμμίζουν τη δυνατότητα του οξειδίου του αιθυλενίου ως συνεργιστικό φυτών στον έλεγχο των κουνουπιών, αυξάνοντας την αποτελεσματικότητα της περμεθρίνης κατά των κουνουπιών, ειδικά σε ανθεκτικούς πληθυσμούς. Οι μελλοντικές εξελίξεις και έρευνες θα απαιτήσουν συνεργιστική βιοανάλυση των ελαίων galangal και alpinia και των απομονωμένων ενώσεων τους, συνδυασμούς εντομοκτόνων φυσικής ή συνθετικής προέλευσης κατά πολλαπλών ειδών και σταδίων κουνουπιών και δοκιμές τοξικότητας έναντι οργανισμών μη-στόχων. Πρακτική χρήση οξειδίου του αιθυλενίου ως βιώσιμου εναλλακτικού συνεργιστικού παράγοντα.
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Παγκόσμια στρατηγική για την πρόληψη και τον έλεγχο του δάγκειου πυρετού 2012–2020. Γενεύη: Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Ιός Ζίκα: ιστορία, εμφάνιση, βιολογία και προοπτικές ελέγχου. Έρευνα κατά των ιών. 2016; 130:69–80.
Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Ενημερωτικό δελτίο δάγκειου πυρετού. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Ημερομηνία πρόσβασης: 20 Ιανουαρίου 2017
Τμήμα Δημόσιας Υγείας. Τρέχουσα κατάσταση των περιπτώσεων δάγγειου πυρετού και αιμορραγικού πυρετού στην Ταϊλάνδη. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Ημερομηνία πρόσβασης: 6 Ιανουαρίου 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 χρόνια πρόληψης και ελέγχου του δάγκειου πυρετού στη Σιγκαπούρη. Ξαφνική μολυσματική ασθένεια. 2006; 12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Προσδιορίστε τις προκλήσεις και προτείνετε λύσεις για τον έλεγχο των ιικών φορέων Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008; 5:362-6.
Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων. Δάγγειος πυρετός, εντομολογία και οικολογία. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Ημερομηνία πρόσβασης: 6 Ιανουαρίου 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Σύγκριση προνυμφικής δραστηριότητας φύλλων, φλοιού, στελεχών και ριζών Jatropa curcas (Euphorbiaceae) έναντι του φορέα ελονοσίας Anopheles gambiae. SZhBR. 2014; 3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Χαρακτηριστικά ενδιαιτημάτων των προνυμφών Anopheles σε περιοχές ελονοσίας του προγράμματος εξάλειψης της ελονοσίας στο νοτιοανατολικό Ιράν. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014; 4 (Suppl 1): S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Ανασκόπηση προσεγγίσεων για τον έλεγχο των φορέων, την πρόληψη και τον έλεγχο των επιδημιών του ιού του Δυτικού Νείλου και των προκλήσεων που αντιμετωπίζει η Ευρώπη. Διάνυσμα παράσιτα. 2014; 7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selection and molecular engines of cypermethrin Resistance in κόκκινες κάμπιες (Amsacta albistriga Walker). Βιοχημική φυσιολογία παρασίτων. 2014; 117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Εργαστηριακή μελέτη αντοχής στην περμεθρίνη και διασταυρούμενης αντοχής του Culex quinquefasciatus σε άλλα εντομοκτόνα. Ερευνητικό Κέντρο Palastor. 2015; 114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Pesticide Chemistry: Human Welfare and the Environment, Vol. 3: Μηχανισμός δράσης, μεταβολισμός και τοξικολογία. Νέα Υόρκη: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Μια ανασκόπηση της αντοχής στα εντομοκτόνα και της αποφυγής συμπεριφοράς των φορέων ανθρώπινων ασθενειών στην Ταϊλάνδη. Παράσιτα διάνυσμα. 2013; 6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Τρέχοντα μοτίβα αντοχής στα εντομοκτόνα μεταξύ των φορέων κουνουπιών στην Ταϊλάνδη. Νοτιοανατολική Ασία J Trop Med Δημόσια Υγεία. 1999; 30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Κατάσταση ελονοσίας στην Ταϊλάνδη. Νοτιοανατολική Ασία J Trop Med Δημόσια Υγεία. 2000; 31:225-37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Χρονική συχνότητα μεταλλάξεων αντίστασης κατά της καταστροφής F1534C και V1016G στα κουνούπια Aedes aegypti στο Τσιάνγκ Μάι, Ταϊλάνδη, και η επίδραση των μεταλλάξεων της ακτινοβολίας στον πυρετό που περιέχει πυρεθροειδή. Aktatrop. 2016; 162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Αντοχή σε εντομοκτόνα στους κύριους φορείς δάγγειου πυρετού Aedes albopictus και Aedes aegypti. Βιοχημική φυσιολογία παρασίτων. 2012; 104:126–31.
Ώρα δημοσίευσης: Ιουλ-08-2024