Σας ευχαριστούμε που επισκεφθήκατε το Nature.com. Η έκδοση του προγράμματος περιήγησης που χρησιμοποιείτε έχει περιορισμένη υποστήριξη CSS. Για καλύτερα αποτελέσματα, συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε μια νεότερη έκδοση του προγράμματος περιήγησής σας (ή να απενεργοποιήσετε τη Λειτουργία συμβατότητας στον Internet Explorer). Εν τω μεταξύ, για να διασφαλίσουμε τη συνεχή υποστήριξη, εμφανίζουμε τον ιστότοπο χωρίς στυλ ή JavaScript.
Τα μυκητοκτόνα χρησιμοποιούνται συχνά κατά την ανθοφορία των καρπών των δέντρων και μπορούν να απειλήσουν τους έντομους επικονιαστές. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για το πώς οι επικονιαστές που δεν είναι μέλισσες (π.χ., μοναχικές μέλισσες, Osmia cornifrons) αντιδρούν στα μυκητοκτόνα επαφής και στα συστηματικά μυκητοκτόνα που χρησιμοποιούνται συνήθως στις μηλιές κατά την ανθοφορία. Αυτό το κενό γνώσης περιορίζει τις ρυθμιστικές αποφάσεις που καθορίζουν τις ασφαλείς συγκεντρώσεις και το χρονοδιάγραμμα ψεκασμού με μυκητοκτόνα. Αξιολογήσαμε τις επιδράσεις δύο μυκητοκτόνων επαφής (captan και mancozeb) και τεσσάρων μυκητοκτόνων ενδιάμεσης στρώσης/φυτοσυστήματος (ciprocycline, myclobutanil, pyrostrobin και trifloxystrobin). Επιδράσεις στην αύξηση βάρους των προνυμφών, την επιβίωση, την αναλογία φύλων και την βακτηριακή ποικιλομορφία. Η αξιολόγηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας μια χρόνια από του στόματος βιοδοκιμασία στην οποία η γύρη υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε τρεις δόσεις με βάση την τρέχουσα συνιστώμενη δόση για χρήση στο πεδίο (1X), μισή δόση (0,5X) και χαμηλή δόση (0,1X). Όλες οι δόσεις mancozeb και pyritisoline μείωσαν σημαντικά το σωματικό βάρος και την επιβίωση των προνυμφών. Στη συνέχεια, αλληλουχήσαμε το γονίδιο 16S για να χαρακτηρίσουμε το προνυμφικό βακτηρίδιο του mancozeb, του μυκητοκτόνου που ευθύνεται για την υψηλότερη θνησιμότητα. Διαπιστώσαμε ότι η βακτηριακή ποικιλομορφία και αφθονία μειώθηκαν σημαντικά στις προνύμφες που τρέφονταν με γύρη επεξεργασμένη με mancozeb. Τα εργαστηριακά μας αποτελέσματα δείχνουν ότι ο ψεκασμός ορισμένων από αυτά τα μυκητοκτόνα κατά την ανθοφορία είναι ιδιαίτερα επιβλαβής για την υγεία του O. cornifrons. Αυτές οι πληροφορίες είναι σχετικές με μελλοντικές αποφάσεις διαχείρισης σχετικά με τη βιώσιμη χρήση προϊόντων προστασίας οπωροφόρων δέντρων και χρησιμεύουν ως βάση για ρυθμιστικές διαδικασίες που αποσκοπούν στην προστασία των επικονιαστών.
Η μοναχική μέλισσα κάστον Osmia cornifrons (Hymenoptera: Megachilidae) εισήχθη στις Ηνωμένες Πολιτείες από την Ιαπωνία στα τέλη της δεκαετίας του 1970 και στις αρχές της δεκαετίας του 1980 και έκτοτε το είδος έχει διαδραματίσει σημαντικό ρόλο ως επικονιαστής σε διαχειριζόμενα οικοσυστήματα. Οι εγκλιματισμένοι πληθυσμοί αυτής της μέλισσας αποτελούν μέρος περίπου 50 ειδών άγριων μελισσών που συμπληρώνουν τις μέλισσες που επικονιάζουν αμυγδαλιές και μηλιές στις Ηνωμένες Πολιτείες2,3. Οι μέλισσες κάστον αντιμετωπίζουν πολλές προκλήσεις, όπως ο κατακερματισμός των οικοτόπων, τα παθογόνα και τα φυτοφάρμακα3,4. Μεταξύ των εντομοκτόνων, τα μυκητοκτόνα μειώνουν την ενεργειακή αύξηση, την αναζήτηση τροφής5 και τη σωματική κατάσταση6,7. Αν και πρόσφατη έρευνα υποδηλώνει ότι η υγεία των μελισσών κάστον επηρεάζεται άμεσα από συμβιωτικούς και εκτοβακτικούς μικροοργανισμούς,8,9 επειδή τα βακτήρια και οι μύκητες μπορούν να επηρεάσουν τη διατροφή και τις ανοσολογικές αποκρίσεις, οι επιπτώσεις της έκθεσης σε μυκητοκτόνα στη μικροβιακή ποικιλομορφία των μελισσών κάστον μόλις αρχίζουν να μελετώνται.
Μυκητοκτόνα με διάφορες επιδράσεις (επαφής και συστηματικές) ψεκάζονται στους οπωρώνες πριν και κατά τη διάρκεια της ανθοφορίας για την αντιμετώπιση ασθενειών όπως η ψώρα της μηλιάς, η πικρή σήψη, η καστανή σήψη και το ωίδιο10,11. Τα μυκητοκτόνα θεωρούνται αβλαβή για τους επικονιαστές, επομένως συνιστώνται στους κηπουρούς κατά την περίοδο της ανθοφορίας. Η έκθεση και η κατάποση αυτών των μυκητοκτόνων από τις μέλισσες είναι σχετικά γνωστή, καθώς αποτελεί μέρος της διαδικασίας καταχώρισης φυτοφαρμάκων από την Υπηρεσία Προστασίας του Περιβάλλοντος των ΗΠΑ και πολλές άλλες εθνικές ρυθμιστικές αρχές12,13,14. Ωστόσο, οι επιδράσεις των μυκητοκτόνων σε μη μέλισσες είναι λιγότερο γνωστές επειδή δεν απαιτούνται βάσει συμφωνιών άδειας κυκλοφορίας στις Ηνωμένες Πολιτείες15. Επιπλέον, γενικά δεν υπάρχουν τυποποιημένα πρωτόκολλα για τον έλεγχο μεμονωμένων μελισσών16,17, και η διατήρηση αποικιών που παρέχουν μέλισσες για έλεγχο είναι δύσκολη18. Δοκιμές σε διαφορετικές διαχειριζόμενες μέλισσες διεξάγονται όλο και περισσότερο στην Ευρώπη και τις ΗΠΑ για τη μελέτη των επιπτώσεων των φυτοφαρμάκων στις άγριες μέλισσες, και πρόσφατα έχουν αναπτυχθεί τυποποιημένα πρωτόκολλα για το O. cornifrons19.
Οι κερασφόρες μέλισσες είναι μονοκύτταρα και χρησιμοποιούνται εμπορικά στις καλλιέργειες κυπρίνων ως συμπλήρωμα ή αντικατάσταση των μελισσών. Αυτές οι μέλισσες εμφανίζονται μεταξύ Μαρτίου και Απριλίου, με τα πρώιμα αρσενικά να εμφανίζονται τρεις έως τέσσερις ημέρες πριν από τα θηλυκά. Μετά το ζευγάρωμα, το θηλυκό συλλέγει ενεργά γύρη και νέκταρ για να παρέχει μια σειρά από κύτταρα γόνου μέσα στην σωληνοειδή κοιλότητα της φωλιάς (φυσική ή τεχνητή)1,20. Τα αυγά τοποθετούνται στη γύρη μέσα στα κύτταρα. Το θηλυκό στη συνέχεια χτίζει ένα αργιλώδες τοίχωμα πριν προετοιμάσει το επόμενο κύτταρο. Οι προνύμφες του πρώτου σταδίου περικλείονται στο χορίο και τρέφονται με εμβρυϊκά υγρά. Από το δεύτερο έως το πέμπτο στάδιο (προνύμφη), οι προνύμφες τρέφονται με γύρη22. Μόλις εξαντληθεί πλήρως η παροχή γύρης, οι προνύμφες σχηματίζουν κουκούλια, νυμφώνονται και εμφανίζονται ως ενήλικες στον ίδιο θάλαμο γόνου, συνήθως στα τέλη του καλοκαιριού20,23. Οι ενήλικες εμφανίζονται την επόμενη άνοιξη. Η επιβίωση των ενηλίκων σχετίζεται με την καθαρή αύξηση ενέργειας (αύξηση βάρους) με βάση την πρόσληψη τροφής. Έτσι, η θρεπτική ποιότητα της γύρης, καθώς και άλλοι παράγοντες όπως ο καιρός ή η έκθεση σε φυτοφάρμακα, είναι καθοριστικοί παράγοντες της επιβίωσης και της υγείας24.
Τα εντομοκτόνα και τα μυκητοκτόνα που εφαρμόζονται πριν από την ανθοφορία είναι ικανά να κινούνται εντός του αγγειακού συστήματος του φυτού σε ποικίλους βαθμούς, από διαστρωματικά (π.χ., ικανά να κινούνται από την άνω επιφάνεια των φύλλων στην κάτω επιφάνεια, όπως ορισμένα μυκητοκτόνα) 25 έως πραγματικά συστημικές επιδράσεις. , τα οποία μπορούν να διεισδύσουν στην κορυφή από τις ρίζες, μπορούν να εισέλθουν στο νέκταρ των λουλουδιών μηλιάς 26, όπου μπορούν να σκοτώσουν τα ενήλικα O. cornifrons 27. Ορισμένα φυτοφάρμακα διηθούνται επίσης στη γύρη, επηρεάζοντας την ανάπτυξη των προνυμφών του καλαμποκιού και προκαλώντας τον θάνατό τους 19. Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι ορισμένα μυκητοκτόνα μπορούν να μεταβάλουν σημαντικά τη συμπεριφορά φωλιάσματος των συγγενών ειδών O. lignaria 28. Επιπλέον, εργαστηριακές και επιτόπιες μελέτες που προσομοιώνουν σενάρια έκθεσης σε φυτοφάρμακα (συμπεριλαμβανομένων των μυκητοκτόνων) έχουν δείξει ότι τα φυτοφάρμακα επηρεάζουν αρνητικά τη φυσιολογία 22, τη μορφολογία 29 και την επιβίωση των μελισσών και ορισμένων μοναχικών μελισσών. Διάφορα μυκητοκτόνα σπρέι που εφαρμόζονται απευθείας στα ανοιχτά άνθη κατά την ανθοφορία μπορεί να μολύνουν τη γύρη που συλλέγεται από τα ενήλικα για την ανάπτυξη των προνυμφών, οι επιπτώσεις των οποίων παραμένουν προς μελέτη 30.
Αναγνωρίζεται ολοένα και περισσότερο ότι η ανάπτυξη των προνυμφών επηρεάζεται από τη γύρη και τις μικροβιακές κοινότητες του πεπτικού συστήματος. Το μικροβίωμα της μέλισσας επηρεάζει παραμέτρους όπως η σωματική μάζα31, οι μεταβολικές αλλαγές22 και η ευαισθησία σε παθογόνα32. Προηγούμενες μελέτες έχουν εξετάσει την επίδραση του αναπτυξιακού σταδίου, των θρεπτικών συστατικών και του περιβάλλοντος στο μικροβίωμα των μοναχικών μελισσών. Αυτές οι μελέτες αποκάλυψαν ομοιότητες στη δομή και την αφθονία των μικροβιωμάτων των προνυμφών και της γύρης33, καθώς και στα πιο κοινά βακτηριακά γένη Pseudomonas και Delftia, μεταξύ των ειδών μοναχικών μελισσών. Ωστόσο, παρόλο που τα μυκητοκτόνα έχουν συσχετιστεί με στρατηγικές για την προστασία της υγείας των μελισσών, οι επιδράσεις των μυκητοκτόνων στο μικροβίωμα των προνυμφών μέσω της άμεσης έκθεσης από το στόμα παραμένουν ανεξερεύνητες.
Αυτή η μελέτη εξέτασε τις επιδράσεις των πραγματικών δόσεων έξι συνήθως χρησιμοποιούμενων μυκητοκτόνων που έχουν εγκριθεί για χρήση σε καρπούς δέντρων στις Ηνωμένες Πολιτείες, συμπεριλαμβανομένων μυκητοκτόνων επαφής και συστηματικών μυκητοκτόνων που χορηγούνται από το στόμα σε προνύμφες σκώληκα καλαμποκιού από μολυσμένα τρόφιμα. Διαπιστώσαμε ότι τα μυκητοκτόνα επαφής και συστηματικά μυκητοκτόνα μείωσαν την αύξηση του σωματικού βάρους των μελισσών και αύξησαν τη θνησιμότητα, με τις πιο σοβαρές επιπτώσεις να σχετίζονται με το mancozeb και το pyrithiopide. Στη συνέχεια, συγκρίναμε τη μικροβιακή ποικιλομορφία των προνυμφών που τρέφονταν με τη δίαιτα γύρης που είχε υποστεί επεξεργασία με mancozeb με εκείνες που τρέφονταν με τη δίαιτα ελέγχου. Συζητάμε τους πιθανούς μηχανισμούς που διέπουν τη θνησιμότητα και τις επιπτώσεις για τα ολοκληρωμένα προγράμματα διαχείρισης παρασίτων και επικονιαστών (IPPM)36.
Ενήλικα O. cornifrons που διαχειμάζουν σε κουκούλια αποκτήθηκαν από το Κέντρο Έρευνας Φρούτων, στο Biglerville, PA, και αποθηκεύτηκαν στους -3 έως 2°C (±0,3°C). Πριν από το πείραμα (600 κουκούλια συνολικά). Τον Μάιο του 2022, 100 κουκούλια O. cornifrons μεταφέρονταν καθημερινά σε πλαστικά κύπελλα (50 κουκούλια ανά κύπελο, DI 5 cm × 15 cm μήκος) και τοποθετήθηκαν μαντηλάκια μέσα στα κύπελλα για να προωθηθεί το άνοιγμα και να δημιουργηθεί ένα μασώμενο υπόστρωμα, μειώνοντας το στρες στις πετρώδεις μέλισσες37. Τοποθετήστε δύο πλαστικά κύπελλα που περιέχουν κουκούλια σε ένα κλουβί εντόμων (30 × 30 × 30 cm, BugDorm MegaView Science Co. Ltd., Ταϊβάν) με ταΐστρες των 10 ml που περιέχουν διάλυμα σακχαρόζης 50% και αποθηκεύστε για τέσσερις ημέρες για να διασφαλίσετε το κλείσιμο και το ζευγάρωμα. 23°C, σχετική υγρασία 60%, φωτοπερίοδος 10 l (χαμηλή ένταση): 14 ημέρες. 100 ζευγαρωμένα θηλυκά και αρσενικά απελευθερώνονταν κάθε πρωί για έξι ημέρες (100 ανά ημέρα) σε δύο τεχνητές φωλιές κατά τη διάρκεια της μέγιστης ανθοφορίας της μηλιάς (φωλιά παγίδας: πλάτος 33,66 × ύψος 30,48 × μήκος 46,99 cm· Συμπληρωματικό Σχήμα 1). Τοποθετήθηκαν στο Δενδροκομείο της Πολιτείας της Πενσυλβάνια, κοντά σε κερασιά (Prunus cerasus 'Eubank' Sweet Cherry Pie™), ροδακινιά (Prunus persica 'Contender'), Prunus persica 'PF 27A' Flamin Fury®), αχλάδια (Pyrus perifolia 'Olympic', Pyrus perifolia 'Shinko', Pyrus perifolia 'Shinseiki'), μηλιά coronaria (Malus coronaria) και πολυάριθμες ποικιλίες μηλιών (Malus coronaria, Malus), εγχώρια μηλιά 'Co-op 30′ Enterprise™, μηλιά Malus 'Co-Op 31′ Winecrisp™, μπιγκόνια 'Freedom', Μπιγκόνια 'Golden Delicious', Μπιγκόνια 'Nova Spy'). Κάθε μπλε πλαστική φωλιά χωράει πάνω σε δύο ξύλινα κουτιά. Κάθε φωλιά περιείχε 800 άδειους σωλήνες από χαρτί kraft (ανοιχτούς σπιράλ, εσωτερική διάμετρος 0,8 cm × μήκος 15 cm) (Jonesville Paper Tube Co., Michigan) που εισήχθησαν σε αδιαφανείς σωλήνες σελοφάν (0,7 OD βλ. Πλαστικά πώματα (πώματα T-1X) παρέχουν θέσεις φωλιάς.
Και οι δύο φωλιές ήταν στραμμένες προς τα ανατολικά και ήταν καλυμμένες με πράσινο πλαστικό φράχτη κήπου (μοντέλο Everbilt #889250EB12, μέγεθος ανοίγματος 5 × 5 cm, 0,95 m × 100 m) για να αποτρέπεται η πρόσβαση τρωκτικών και πτηνών και τοποθετούνταν στην επιφάνεια του εδάφους δίπλα στα κουτιά χώματος του κουτιού φωλιάς. Κουτί φωλιάς (Συμπληρωματικό Σχήμα 1α). Τα αυγά του πυρηνοκακάου συλλέγονταν καθημερινά συλλέγοντας 30 σωλήνες από τις φωλιές και μεταφέροντάς τους στο εργαστήριο. Χρησιμοποιώντας ψαλίδι, κάντε μια τομή στο άκρο του σωλήνα και στη συνέχεια αποσυναρμολογήστε τον σπειροειδή σωλήνα για να αποκαλύψετε τα κελιά του γόνου. Τα μεμονωμένα αυγά και η γύρη τους αφαιρέθηκαν χρησιμοποιώντας μια καμπύλη σπάτουλα (κιτ εργαλείων Microslide, BioQuip Products Inc., Καλιφόρνια). Τα αυγά επωάστηκαν σε υγρό διηθητικό χαρτί και τοποθετήθηκαν σε τρυβλίο Petri για 2 ώρες πριν χρησιμοποιηθούν στα πειράματά μας (Συμπληρωματικό Σχήμα 1b-d).
Στο εργαστήριο, αξιολογήσαμε την από του στόματος τοξικότητα έξι μυκητοκτόνων που εφαρμόστηκαν πριν και κατά τη διάρκεια της άνθισης της μηλιάς σε τρεις συγκεντρώσεις (0,1X, 0,5X και 1X, όπου 1X είναι η ένδειξη που εφαρμόζεται ανά 100 γαλόνια νερού/στρέμμα. Υψηλή δόση πεδίου = συγκέντρωση στο πεδίο). , Πίνακας 1). Κάθε συγκέντρωση επαναλήφθηκε 16 φορές (n = 16). Δύο μυκητοκτόνα επαφής (Πίνακας S1: mancozeb 2696,14 ppm και captan 2875,88 ppm) και τέσσερα συστηματικά μυκητοκτόνα (Πίνακας S1: πυριθειοστροβίνη 250,14 ppm, τριφλοξυστροβίνη 110,06 ppm, μυκλοβουτανίλ αζόλη 75 0,12 ppm, κυπροδινίλη 280,845 ppm) παρουσίασαν τοξικότητα σε φρούτα, λαχανικά και καλλωπιστικές καλλιέργειες. Ομογενοποιήσαμε τη γύρη χρησιμοποιώντας έναν μύλο, μεταφέραμε 0,20 g σε ένα φρεάτιο (πλάκα Falcon 24 φρεατίων) και προσθέσαμε και αναμείξαμε 1 μL διαλύματος μυκητοκτόνου για να σχηματίσουμε πυραμιδική γύρη με φρεάτια βάθους 1 mm στα οποία τοποθετήθηκαν τα αυγά. Τοποθετήστε τα χρησιμοποιώντας μια μίνι σπάτουλα (Συμπληρωματικό Σχήμα 1c, d). Τα τρυβλία Falcon αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία δωματίου (25°C) και 70% σχετική υγρασία. Τα συγκρίναμε με προνύμφες ελέγχου που τράφηκαν με ομοιογενή δίαιτα γύρης που είχε υποστεί επεξεργασία με καθαρό νερό. Καταγράψαμε τη θνησιμότητα και μετρήσαμε το βάρος των προνυμφών κάθε δεύτερη μέρα μέχρι οι προνύμφες να φτάσουν στην προνεογνική ηλικία χρησιμοποιώντας έναν αναλυτικό ζυγό (Fisher Scientific, ακρίβεια = 0,0001 g). Τέλος, η αναλογία φύλων αξιολογήθηκε ανοίγοντας το κουκούλι μετά από 2,5 μήνες.
Το DNA εκχυλίστηκε από ολόκληρες προνύμφες O. cornifrons (n = 3 ανά συνθήκη θεραπείας, γύρη που είχε υποστεί αγωγή με mancozeb και μη επεξεργασμένη) και πραγματοποιήσαμε αναλύσεις μικροβιακής ποικιλομορφίας σε αυτά τα δείγματα, ειδικά επειδή στο mancozeb παρατηρήθηκε η υψηλότερη θνησιμότητα στις προνύμφες που έλαβαν MnZn. Το DNA ενισχύθηκε, καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ DNAZymoBIOMICS®-96 MagBead DNA (Zymo Research, Irvine, CA) και αλληλουχήθηκε (600 κύκλοι) σε ένα κιτ Illumina® MiSeq™ χρησιμοποιώντας το κιτ v3. Η στοχευμένη αλληλούχιση των βακτηριακών γονιδίων 16S ριβοσωμικού RNA πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Quick-16S™ NGS Library Prep Kit (Zymo Research, Irvine, CA) χρησιμοποιώντας εκκινητές που στοχεύουν την περιοχή V3-V4 του γονιδίου 16S rRNA. Επιπλέον, η αλληλούχιση 18S πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 10% συμπερίληψη PhiX και η ενίσχυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το ζεύγος εκκινητών 18S001 και NS4.
Εισαγωγή και επεξεργασία ζευγαρωμένων αναγνώσεων39 χρησιμοποιώντας τον αγωγό QIIME2 (v2022.11.1). Αυτές οι αναγνώσεις περικόπηκαν και συγχωνεύτηκαν και οι χιμαιρικές αλληλουχίες αφαιρέθηκαν χρησιμοποιώντας το πρόσθετο DADA2 στο QIIME2 (qiime dada2 noise pairing)40. Οι αναθέσεις κλάσεων 16S και 18S πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πρόσθετο ταξινόμησης αντικειμένων Classify-sklearn και τον προ-εκπαιδευμένο artifact silva-138-99-nb-classifier.
Όλα τα πειραματικά δεδομένα ελέγχθηκαν για κανονικότητα (Shapiro-Wilks) και ομοιογένεια των διακυμάνσεων (δοκιμή Levene). Επειδή το σύνολο δεδομένων δεν πληρούσε τις υποθέσεις της παραμετρικής ανάλυσης και ο μετασχηματισμός δεν κατάφερε να τυποποιήσει τα υπολείμματα, πραγματοποιήσαμε μια μη παραμετρική αμφίδρομη ANOVA (Kruskal-Wallis) με δύο παράγοντες [χρόνο (τριφασικά χρονικά σημεία 2, 5 και 8 ημερών) και μυκητοκτόνο] για να αξιολογήσουμε την επίδραση της θεραπείας στο νωπό βάρος των προνυμφών, και στη συνέχεια πραγματοποιήθηκαν μη παραμετρικές συγκρίσεις ανά ζεύγη μετά την εξέταση Wilcoxon. Χρησιμοποιήσαμε ένα γενικευμένο γραμμικό μοντέλο (GLM) με κατανομή Poisson για να συγκρίνουμε τις επιδράσεις των μυκητοκτόνων στην επιβίωση σε τρεις συγκεντρώσεις μυκητοκτόνων41,42. Για την ανάλυση διαφορικής αφθονίας, ο αριθμός των παραλλαγών αλληλουχίας αμπλικονίου (ASV) συμπτύχθηκε σε επίπεδο γένους. Οι συγκρίσεις της διαφορικής αφθονίας μεταξύ ομάδων χρησιμοποιώντας 16S (επίπεδο γένους) και σχετική αφθονία 18S πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα γενικευμένο προσθετικό μοντέλο για θέση, κλίμακα και σχήμα (GAMLSS) με κατανομές οικογένειας με μηδενική διόγκωση βήτα (BEZI), οι οποίες μοντελοποιήθηκαν σε μια μακροεντολή στο Microbiome R43 (v1.1). 1). Αφαιρέστε τα μιτοχονδριακά και χλωροπλαστικά είδη πριν από τη διαφορική ανάλυση. Λόγω των διαφορετικών ταξινομικών επιπέδων του 18S, μόνο το χαμηλότερο επίπεδο κάθε ταξινομικής ομάδας χρησιμοποιήθηκε για διαφορικές αναλύσεις. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας R (v. 3.4.3., έργο CRAN) (Team 2013).
Η έκθεση σε mancozeb, pyrithiostrobin και trifloxystrobin μείωσε σημαντικά την αύξηση σωματικού βάρους στο O. cornifrons (Εικ. 1). Αυτές οι επιδράσεις παρατηρήθηκαν σταθερά και για τις τρεις δόσεις που αξιολογήθηκαν (Εικ. 1a–c). Η κυκλοστροβίνη και η μυκλοβουτανίλη δεν μείωσαν σημαντικά το βάρος των προνυμφών.
Μέσο νωπό βάρος των προνυμφών του πυρετού του βλαστού μετρήθηκε σε τρία χρονικά σημεία υπό τέσσερις διαιτητικές αγωγές (ομοιογενής τροφοδοσία γύρης + μυκητοκτόνο: έλεγχος, δόσεις 0,1X, 0,5X και 1X). (α) Χαμηλή δόση (0,1X): πρώτο χρονικό σημείο (ημέρα 1): χ2: 30,99, DF = 6; P < 0,0001, δεύτερο χρονικό σημείο (ημέρα 5): 22,83, DF = 0,0009; τρίτη φορά; σημείο (ημέρα 8): χ2: 28,39, DF = 6; (β) μισή δόση (0,5X): πρώτο χρονικό σημείο (ημέρα 1): χ2: 35,67, DF = 6; P < 0,0001, δεύτερο χρονικό σημείο (ημέρα πρώτη). ): χ2: 15,98, DF = 6; P = 0,0090; τρίτο χρονικό σημείο (ημέρα 8) χ2: 16,47, DF = 6; (γ) Θέση ή πλήρης δόση (1X): πρώτο χρονικό σημείο (ημέρα 1) χ2: 20,64, P = 6; P = 0,0326, δεύτερο χρονικό σημείο (ημέρα 5): χ2: 22,83, DF = 6; P = 0,0009; τρίτο χρονικό σημείο (ημέρα 8): χ2: 28,39, DF = 6; μη παραμετρική ανάλυση διακύμανσης. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± SE των συγκρίσεων ανά ζεύγη (α = 0,05) (n = 16) *P ≤ 0,05, **P ≤ 0,001, ***P ≤ 0,0001.
Στη χαμηλότερη δόση (0,1X), το σωματικό βάρος των προνυμφών μειώθηκε κατά 60% με την τριφλοξυστροβίνη, 49% με τη μανκοζέμπη, 48% με τη μυκλοβουτανίλη και 46% με την πυριθιστροβίνη (Εικ. 1α). Όταν εκτέθηκαν στο μισό της δόσης πεδίου (0,5X), το σωματικό βάρος των προνυμφών μανκοζέμπης μειώθηκε κατά 86%, η πυριθειοστροβίνη κατά 52% και η τριφλοξυστροβίνη κατά 50% (Εικ. 1β). Μια πλήρης δόση πεδίου (1X) μανκοζέμπης μείωσε το βάρος των προνυμφών κατά 82%, η πυριθειοστροβίνη κατά 70% και η τριφλοξυστροβίνη, η μυκλοβουτανίλη και η σαγκάρντ κατά περίπου 30% (Εικ. 1γ).
Η θνησιμότητα ήταν υψηλότερη μεταξύ των προνυμφών που τρέφονταν με γύρη που είχε υποστεί αγωγή με mancozeb, ακολουθούμενη από πυριθειοστροβίνη και τριφλοξυστροβίνη. Η θνησιμότητα αυξήθηκε με την αύξηση των δόσεων mancozeb και πυριτισολίνης (Εικ. 2, Πίνακας 2). Ωστόσο, η θνησιμότητα του πυραλίδα του καλαμποκιού αυξήθηκε μόνο ελαφρώς καθώς αυξάνονταν οι συγκεντρώσεις τριφλοξυστροβίνης. Η κυπροδινίλη και η καπτάνη δεν αύξησαν σημαντικά τη θνησιμότητα σε σύγκριση με τις αγωγές ελέγχου.
Η θνησιμότητα των προνυμφών της μύγας του πυρετού συγκρίθηκε μετά την κατάποση γύρης που είχε υποστεί ατομική επεξεργασία με έξι διαφορετικά μυκητοκτόνα. Το Mancozeb και η πεντοπυραμίδη ήταν πιο ευαίσθητες στην έκθεση από το στόμα σε προνύμφες καλαμποκιού (GLM: χ = 29,45, DF = 20, P = 0,0059) (γραμμή, κλίση = 0,29, P < 0,001; κλίση = 0,24, P <0,00)).
Κατά μέσο όρο, σε όλες τις θεραπείες, το 39,05% των ασθενών ήταν γυναίκες και το 60,95% άνδρες. Μεταξύ των θεραπειών ελέγχου, το ποσοστό των γυναικών ήταν 40% τόσο στις μελέτες χαμηλής δόσης (0,1X) όσο και στη μισή δόση (0,5X), και 30% στις μελέτες δόσης πεδίου (1X). Στη δόση 0,1X, μεταξύ των προνυμφών που τρέφονταν με γύρη και υποβλήθηκαν σε θεραπεία με mancozeb και myclobutanil, το 33,33% των ενηλίκων ήταν θηλυκά, το 22% των ενηλίκων ήταν θηλυκά, το 44% των ενήλικων προνυμφών ήταν θηλυκά, το 44% των ενήλικων προνυμφών ήταν θηλυκά, το 41% των ενήλικων προνυμφών ήταν θηλυκά και η ομάδα ελέγχου ήταν 31% (Εικ. 3α). Σε δόση 0,5 φορές μεγαλύτερη από τη δόση, το 33% των ενήλικων σκωλήκων στην ομάδα mancozeb και pyrithiostrobin ήταν θηλυκά, το 36% στην ομάδα trifloxystrobin, το 41% στην ομάδα myclobutanil και το 46% στην ομάδα cyprostrobin. Αυτό το ποσοστό ήταν 53% στην ομάδα captan και 38% στην ομάδα ελέγχου (Εικ. 3b). Στη δόση 1X, το 30% της ομάδας mancozeb ήταν γυναίκες, το 36% της ομάδας pyrithiostrobin, το 44% της ομάδας trifloxystrobin, το 38% της ομάδας myclobutanil, το 50% της ομάδας ελέγχου ήταν γυναίκες – 38,5% (Εικ. 3c).
Ποσοστό θηλυκών και αρσενικών πυρακτωτικών μυκήτων μετά από έκθεση σε μυκητοκτόνο προνυμφικού σταδίου. (α) Χαμηλή δόση (0,1X). (β) Μισή δόση (0,5X). (γ) Δόση πεδίου ή πλήρης δόση (1X).
Η ανάλυση αλληλουχίας 16S έδειξε ότι η βακτηριακή ομάδα διέφερε μεταξύ των προνυμφών που τρέφονταν με γύρη που είχε υποστεί επεξεργασία με mancozeb και των προνυμφών που είχαν τραφεί με ακατέργαστη γύρη (Εικ. 4α). Ο μικροβιακός δείκτης των μη ακατέργαστων προνυμφών που τρέφονταν με γύρη ήταν υψηλότερος από αυτόν των προνυμφών που τρέφονταν με γύρη που είχε υποστεί επεξεργασία με mancozeb (Εικ. 4β). Αν και η παρατηρούμενη διαφορά στον πλούτο μεταξύ των ομάδων δεν ήταν στατιστικά σημαντική, ήταν σημαντικά χαμηλότερη από αυτή που παρατηρήθηκε για τις προνύμφες που τρέφονταν με ακατέργαστη γύρη (Εικ. 4γ). Η σχετική αφθονία έδειξε ότι η μικροχλωρίδα των προνυμφών που τρέφονταν με γύρη ελέγχου ήταν πιο ποικίλη από αυτή των προνυμφών που τρέφονταν με προνύμφες που είχαν υποστεί επεξεργασία με mancozeb (Εικ. 5α). Η περιγραφική ανάλυση αποκάλυψε την παρουσία 28 γενών σε δείγματα ελέγχου και σε δείγματα που είχαν υποστεί επεξεργασία με mancozeb (Εικ. 5β). c Η ανάλυση χρησιμοποιώντας αλληλούχιση 18S δεν αποκάλυψε σημαντικές διαφορές (Συμπληρωματικό Σχήμα 2).
Τα προφίλ SAV που βασίζονται σε αλληλουχίες 16S συγκρίθηκαν με τον πλούτο Shannon και τον παρατηρούμενο πλούτο σε επίπεδο φύλου. (α) Ανάλυση κύριων συντεταγμένων (PCoA) με βάση τη συνολική δομή της μικροβιακής κοινότητας σε προνύμφες που τράφηκαν με γύρη χωρίς επεξεργασία ή μάρτυρες (μπλε) και προνύμφες που τράφηκαν με mancozeb (πορτοκαλί). Κάθε σημείο δεδομένων αντιπροσωπεύει ένα ξεχωριστό δείγμα. Η PCoA υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την απόσταση Bray-Curtis της πολυμεταβλητής κατανομής t. Τα οβάλ αντιπροσωπεύουν το επίπεδο εμπιστοσύνης 80%. (β) Boxplot, ακατέργαστα δεδομένα πλούτου Shannon (σημεία) και γ. Παρατηρήσιμος πλούτος. Τα Boxplots δείχνουν πλαίσια για τη διάμεση γραμμή, το διατεταρτημοριακό εύρος (IQR) και το 1,5 × IQR (n = 3).
Σύνθεση μικροβιακών κοινοτήτων προνυμφών που τρέφονται με γύρη που έχει υποστεί επεξεργασία με mancozeb και χωρίς επεξεργασία. (α) Σχετική αφθονία μικροβιακών γενών που αναγράφονται στις προνύμφες. (β) Χάρτης θερμότητας των αναγνωρισμένων μικροβιακών κοινοτήτων. Delftia (λόγος πιθανοτήτων (OR) = 0,67, P = 0,0030) και Pseudomonas (OR = 0,3, P = 0,0074), Microbacterium (OR = 0,75, P = 0,0617) (OR = 1,5, P = 0,0060). Οι σειρές του χάρτη θερμότητας ομαδοποιούνται χρησιμοποιώντας απόσταση συσχέτισης και μέση συνδεσιμότητα.
Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η από του στόματος έκθεση σε μυκητοκτόνα επαφής (mancozeb) και συστηματικά (pyrostrobin και trifloxystrobin), που εφαρμόζονται ευρέως κατά την ανθοφορία, μείωσε σημαντικά την αύξηση βάρους και την αυξημένη θνησιμότητα των προνυμφών καλαμποκιού. Επιπλέον, το mancozeb μείωσε σημαντικά την ποικιλομορφία και τον πλούτο του μικροβιώματος κατά το προνεφελικό στάδιο. Η μυκλοβουτανίλη, ένα άλλο συστηματικό μυκητοκτόνο, μείωσε σημαντικά την αύξηση του σωματικού βάρους των προνυμφών και στις τρεις δόσεις. Αυτό το αποτέλεσμα ήταν εμφανές στο δεύτερο (5η ημέρα) και στο τρίτο (8η ημέρα) χρονικό σημείο. Αντίθετα, η κυπροδινίλη και η καπτάνη δεν μείωσαν σημαντικά την αύξηση βάρους ή την επιβίωση σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Από όσο γνωρίζουμε, αυτή η εργασία είναι η πρώτη που προσδιορίζει τις επιδράσεις των ρυθμών καλλιέργειας στο πεδίο διαφορετικών μυκητοκτόνων που χρησιμοποιούνται για την προστασία των καλλιεργειών καλαμποκιού μέσω της άμεσης έκθεσης στη γύρη.
Όλες οι θεραπείες με μυκητοκτόνα μείωσαν σημαντικά την αύξηση σωματικού βάρους σε σύγκριση με τις θεραπείες ελέγχου. Το Mancozeb είχε τη μεγαλύτερη επίδραση στην αύξηση σωματικού βάρους των προνυμφών με μέση μείωση 51%, ακολουθούμενο από την πυριθειοστροβίνη. Ωστόσο, άλλες μελέτες δεν έχουν αναφέρει δυσμενείς επιπτώσεις των δόσεων μυκητοκτόνων στο πεδίο στα στάδια των προνυμφών44. Αν και τα βιοκτόνα διθειοκαρβαμικού έχουν αποδειχθεί ότι έχουν χαμηλή οξεία τοξικότητα45, τα αιθυλενοδιθειοκαρβαμικά (EBDCS) όπως το mancozeb μπορούν να αποικοδομηθούν σε ουρία αιθυλενοσουλφίδιο. Δεδομένων των μεταλλαξιογόνων επιδράσεών του σε άλλα ζώα, αυτό το προϊόν αποικοδόμησης μπορεί να είναι υπεύθυνο για τις παρατηρούμενες επιδράσεις46,47. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι ο σχηματισμός αιθυλενοθειουρίας επηρεάζεται από παράγοντες όπως η αυξημένη θερμοκρασία48, τα επίπεδα υγρασίας49 και η διάρκεια αποθήκευσης του προϊόντος50. Οι κατάλληλες συνθήκες αποθήκευσης για τα βιοκτόνα μπορούν να μετριάσουν αυτές τις παρενέργειες. Επιπλέον, η Ευρωπαϊκή Αρχή για την Ασφάλεια των Τροφίμων έχει εκφράσει ανησυχία για την τοξικότητα της πυριθειοπίδης, η οποία έχει αποδειχθεί καρκινογόνος για το πεπτικό σύστημα άλλων ζώων51.
Η από του στόματος χορήγηση mancozeb, pyrithiostrobin και trifloxystrobin αυξάνει τη θνησιμότητα των προνυμφών του πυριθίου του καλαμποκιού. Αντίθετα, η μυκλοβουτανίλη, η σιπροκυκλίνη και το captan δεν είχαν καμία επίδραση στη θνησιμότητα. Αυτά τα αποτελέσματα διαφέρουν από αυτά των Ladurner et al.52, οι οποίοι έδειξαν ότι το captan μείωσε σημαντικά την επιβίωση των ενήλικων O. lignaria και Apis mellifera L. (Υμενόπτερα, Apisidae). Επιπλέον, έχει βρεθεί ότι μυκητοκτόνα όπως το captan και το boscalid προκαλούν θνησιμότητα των προνυμφών52,53,54 ή μεταβάλλουν τη διατροφική συμπεριφορά55. Αυτές οι αλλαγές, με τη σειρά τους, μπορούν να επηρεάσουν τη θρεπτική ποιότητα της γύρης και τελικά το ενεργειακό κέρδος του προνυμφικού σταδίου. Η θνησιμότητα που παρατηρήθηκε στην ομάδα ελέγχου ήταν σύμφωνη με άλλες μελέτες 56,57.
Η αναλογία φύλων που ευνοεί τα αρσενικά και παρατηρείται στην εργασία μας μπορεί να εξηγηθεί από παράγοντες όπως το ανεπαρκές ζευγάρωμα και οι κακές καιρικές συνθήκες κατά την ανθοφορία, όπως είχε προταθεί προηγουμένως για το O. cornuta από τους Vicens και Bosch. Παρόλο που τα θηλυκά και τα αρσενικά στη μελέτη μας είχαν τέσσερις ημέρες για να ζευγαρώσουν (μια περίοδος που γενικά θεωρείται επαρκής για επιτυχές ζευγάρωμα), μειώσαμε σκόπιμα την ένταση του φωτός για να ελαχιστοποιήσουμε το στρες. Ωστόσο, αυτή η τροποποίηση μπορεί ακούσια να επηρεάσει τη διαδικασία ζευγαρώματος61. Επιπλέον, οι μέλισσες βιώνουν αρκετές ημέρες δυσμενών καιρικών συνθηκών, συμπεριλαμβανομένης της βροχής και των χαμηλών θερμοκρασιών (<5°C), οι οποίες μπορούν επίσης να επηρεάσουν αρνητικά την επιτυχία του ζευγαρώματος4,23.
Παρόλο που η μελέτη μας επικεντρώθηκε σε ολόκληρο το μικροβίωμα των προνυμφών, τα αποτελέσματά μας παρέχουν πληροφορίες για πιθανές σχέσεις μεταξύ των βακτηριακών κοινοτήτων που μπορεί να είναι κρίσιμες για τη διατροφή των μελισσών και την έκθεση σε μυκητοκτόνα. Για παράδειγμα, οι προνύμφες που τρέφονταν με γύρη που είχε υποστεί επεξεργασία με mancozeb είχαν σημαντικά μειωμένη δομή και αφθονία της μικροβιακής κοινότητας σε σύγκριση με τις προνύμφες που τρέφονταν με ακατέργαστη γύρη. Στις προνύμφες που κατανάλωναν ακατέργαστη γύρη, οι βακτηριακές ομάδες Proteobacteria και Actinobacteria ήταν κυρίαρχες και ήταν κυρίως αερόβιες ή προαιρετικά αερόβιες. Τα βακτήρια Delft, που συνήθως σχετίζονται με μοναχικά είδη μέλισσας, είναι γνωστό ότι έχουν αντιβιοτική δράση, υποδεικνύοντας έναν πιθανό προστατευτικό ρόλο έναντι παθογόνων. Ένα άλλο βακτηριακό είδος, η Pseudomonas, ήταν άφθονη στις προνύμφες που τρέφονταν με ακατέργαστη γύρη, αλλά ήταν σημαντικά μειωμένη στις προνύμφες που είχαν υποστεί επεξεργασία με mancozeb. Τα αποτελέσματά μας υποστηρίζουν προηγούμενες μελέτες που αναγνώρισαν την Pseudomonas ως ένα από τα πιο άφθονα γένη στο O. bicornis35 και σε άλλες μοναχικές σφήκες34. Παρόλο που δεν έχουν μελετηθεί πειραματικά στοιχεία για τον ρόλο της Pseudomonas στην υγεία του O. cornifrons, έχει αποδειχθεί ότι αυτό το βακτήριο προάγει τη σύνθεση προστατευτικών τοξινών στο σκαθάρι Paederus fuscipes και προάγει τον μεταβολισμό της αργινίνης in vitro 35, 65. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδηλώνουν έναν πιθανό ρόλο στην ιική και βακτηριακή άμυνα κατά τη διάρκεια του χρόνου ανάπτυξης των προνυμφών του O. cornifrons. Το Microbacterium είναι ένα άλλο γένος που εντοπίστηκε στη μελέτη μας και αναφέρεται ότι υπάρχει σε μεγάλους αριθμούς στις προνύμφες της μαύρης μύγας-στρατιώτη υπό συνθήκες πείνας66. Στις προνύμφες του O. cornifrons, τα μικροβακτήρια μπορούν να συμβάλλουν στην ισορροπία και την ανθεκτικότητα του μικροβιώματος του εντέρου υπό συνθήκες στρες. Επιπλέον, ο Rhodococcus βρίσκεται στις προνύμφες του O. cornifrons και είναι γνωστός για τις ικανότητές του στην αποτοξίνωση67. Αυτό το γένος βρίσκεται επίσης στο έντερο του A. florea, αλλά σε πολύ χαμηλή αφθονία68. Τα αποτελέσματά μας καταδεικνύουν την παρουσία πολλαπλών γενετικών παραλλαγών σε πολλά μικροβιακά taxa που μπορούν να μεταβάλουν τις μεταβολικές διεργασίες στις προνύμφες. Ωστόσο, απαιτείται καλύτερη κατανόηση της λειτουργικής ποικιλομορφίας του O. cornifrons.
Συνοπτικά, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η mancozeb, η pyrithiostrobin και η trifloxystrobin μείωσαν την αύξηση σωματικού βάρους και την αυξημένη θνησιμότητα των προνυμφών του πυριθίου του καλαμποκιού. Παρόλο που υπάρχει αυξανόμενη ανησυχία σχετικά με τις επιπτώσεις των μυκητοκτόνων στους επικονιαστές, υπάρχει ανάγκη για καλύτερη κατανόηση των επιδράσεων των υπολειμματικών μεταβολιτών αυτών των ενώσεων. Αυτά τα αποτελέσματα μπορούν να ενσωματωθούν σε συστάσεις για ολοκληρωμένα προγράμματα διαχείρισης επικονιαστών που βοηθούν τους αγρότες να αποφεύγουν τη χρήση ορισμένων μυκητοκτόνων πριν και κατά τη διάρκεια της ανθοφορίας των οπωροφόρων δέντρων, επιλέγοντας μυκητοκτόνα και μεταβάλλοντας τον χρόνο εφαρμογής ή ενθαρρύνοντας τη χρήση λιγότερο επιβλαβών εναλλακτικών λύσεων 36. Αυτές οι πληροφορίες είναι σημαντικές για την ανάπτυξη συστάσεων σχετικά με τη χρήση φυτοφαρμάκων, όπως η προσαρμογή των υφιστάμενων προγραμμάτων ψεκασμού και η αλλαγή του χρόνου ψεκασμού κατά την επιλογή μυκητοκτόνων ή η προώθηση της χρήσης λιγότερο επικίνδυνων εναλλακτικών λύσεων. Απαιτείται περαιτέρω έρευνα σχετικά με τις δυσμενείς επιπτώσεις των μυκητοκτόνων στην αναλογία φύλων, τη διατροφική συμπεριφορά, το μικροβίωμα του εντέρου και τους μοριακούς μηχανισμούς που διέπουν την απώλεια βάρους και τη θνησιμότητα του πυριθίου του καλαμποκιού.
Τα δεδομένα πηγής 1, 2 και 3 στα Σχήματα 1 και 2 έχουν κατατεθεί στο αποθετήριο δεδομένων figshare DOI: https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996245 και https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996233. Οι αλληλουχίες που αναλύθηκαν στην παρούσα μελέτη (Σχήματα 4, 5) είναι διαθέσιμες στο αποθετήριο NCBI SRA με αριθμό πρόσβασης PRJNA1023565.
Bosch, J. και Kemp, WP Ανάπτυξη και καθιέρωση ειδών μελισσών ως επικονιαστών γεωργικών καλλιεργειών: το παράδειγμα του γένους Osmia. (Υμενόπτερα: Megachilidae) και οπωροφόρων δέντρων. bull. Ntomore. resource. 92, 3–16 (2002).
Parker, MG et al. Πρακτικές επικονίασης και αντιλήψεις για εναλλακτικούς επικονιαστές μεταξύ των καλλιεργητών μήλων στη Νέα Υόρκη και την Πενσυλβάνια. ενημέρωση. Γεωργία. συστήματα τροφίμων. 35, 1–14 (2020).
Koch I., Lonsdorf EW, Artz DR, Pitts-Singer TL και Ricketts TH Οικολογία και οικονομικά της επικονίασης αμυγδάλων με χρήση ιθαγενών μελισσών. J. Economics. Ntomore. 111, 16–25 (2018).
Lee, E., He, Y., και Park, Y.-L. Επιπτώσεις της κλιματικής αλλαγής στη φαινολογία του τραγόπανου: επιπτώσεις στη διαχείριση του πληθυσμού. Climb. Change 150, 305–317 (2018).
Artz, DR και Pitts-Singer, TL Επίδραση των ψεκασμών με μυκητοκτόνα και ανοσοενισχυτικά στη συμπεριφορά φωλιάσματος δύο διαχειριζόμενων μοναχικών μελισσών (Osmia lignaria και Megachile rotundata). PloS One 10, e0135688 (2015).
Beauvais, S. et al. Ένα μυκητοκτόνο χαμηλής τοξικότητας για καλλιέργειες (φενμπουκοναζόλη) παρεμβαίνει στα σήματα ποιότητας αναπαραγωγής των αρσενικών, με αποτέλεσμα τη μειωμένη επιτυχία ζευγαρώματος σε άγριες μοναχικές μέλισσες. J. Apps. ecology. 59, 1596–1607 (2022).
Sgolastra F. et al. Τα νεονικοτινοειδή εντομοκτόνα και η βιοσύνθεση εργοστερόλης καταστέλλουν τη συνεργιστική θνησιμότητα μυκητοκτόνων σε τρία είδη μελισσών. Pest control. the science. 73, 1236–1243 (2017).
Kuhneman JG, Gillung J, Van Dyck MT, Fordyce RF. και Danforth BN Οι μοναχικές προνύμφες σφηκών μεταβάλλουν την βακτηριακή ποικιλομορφία που παρέχεται από τη γύρη στις μέλισσες που φωλιάζουν στο στέλεχος Osmia cornifrons (Megachilidae). front. μικροοργανισμός. 13, 1057626 (2023).
Dharampal PS, Danforth BN και Steffan SA Οι εκτοσυμβιωτικοί μικροοργανισμοί στη ζυμωμένη γύρη είναι εξίσου σημαντικοί για την ανάπτυξη των μοναχικών μελισσών όσο και η ίδια η γύρη. οικολογία. εξέλιξη. 12. e8788 (2022).
Kelderer M, Manici LM, Caputo F και Thalheimer M. Φύτευση μεταξύ σειρών σε μηλιές για τον έλεγχο ασθενειών επανασποράς: μια πρακτική μελέτη αποτελεσματικότητας βασισμένη σε μικροβιακούς δείκτες. Plant Soil 357, 381–393 (2012).
Martin PL, Kravchik T., Khodadadi F., Achimovich SG και Peter KA Πικρή σήψη μήλων στις Ηνωμένες Πολιτείες της Μέσης Ατλαντικής: αξιολόγηση των αιτιολογικών ειδών και η επίδραση των περιφερειακών καιρικών συνθηκών και της ευαισθησίας των καλλιεργειών. Phytopathology 111, 966–981 (2021).
Cullen MG, Thompson LJ, Carolan JK, Stout JK. και Stanley DA Μυκητοκτόνα, ζιζανιοκτόνα και μέλισσες: μια συστηματική ανασκόπηση της υπάρχουσας έρευνας και μεθόδων. PLoS One 14, e0225743 (2019).
Pilling, ED και Jepson, PC Συνεργιστικές επιδράσεις μυκητοκτόνων EBI και πυρεθροειδών εντομοκτόνων στις μέλισσες (Apis mellifera). pests the science. 39, 293–297 (1993).
Mussen, EC, Lopez, JE και Peng, CY Επίδραση επιλεγμένων μυκητοκτόνων στην ανάπτυξη και εξέλιξη των προνυμφών της μέλισσας Apis mellifera L. (Υμενόπτερα: Apidae). Τετάρτη. Ntomore. 33, 1151-1154 (2004).
Van Dyke, M., Mullen, E., Wickstead, D., και McArt, S. Οδηγός λήψης αποφάσεων για τη χρήση φυτοφαρμάκων για την προστασία των επικονιαστών σε δενδρόκηπους (Πανεπιστήμιο Cornell, 2018).
Iwasaki, JM και Hogendoorn, K. Έκθεση μελισσών σε μη φυτοφάρμακα: ανασκόπηση μεθόδων και αναφερόμενων αποτελεσμάτων. Γεωργία. οικοσύστημα. Τετάρτη. 314, 107423 (2021).
Kopit AM, Klinger E, Cox-Foster DL, Ramirez RA. και Pitts-Singer TL Επίδραση του τύπου τροφοδοσίας και της έκθεσης σε φυτοφάρμακα στην ανάπτυξη των προνυμφών του Osmia lignaria (Υμενόπτερα: Megachilidae). Wednesday. Ntomore. 51, 240–251 (2022).
Kopit AM και Pitts-Singer TL Οδοί έκθεσης σε φυτοφάρμακα σε μοναχικές μέλισσες που ζουν σε άδειες φωλιές. Wednesday. Ntomore. 47, 499–510 (2018).
Pan, NT et al. Ένα νέο πρωτόκολλο βιοδοκιμασίας κατάποσης για την αξιολόγηση της τοξικότητας των φυτοφαρμάκων σε ενήλικες ιαπωνικές μέλισσες κήπου (Osmia cornifrons). η επιστήμη. Αναφορές 10, 9517 (2020).
Ώρα δημοσίευσης: 14 Μαΐου 2024